β-catenin基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位

作者：张成宏; 沈涛; 佟宇鑫; 李妍; 李丰

来源：解剖科学进展, 2014, 20(05): 436-439.

DOI：10.16695/j.cnki.1006-2947.2014.05.002

• β-catenin基因
• 质粒构建
• NIH3T3细胞
• 基因表达与定位

目的构建β-catenin真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取工具细胞NIH3T3的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增β-catenin基因cDNA全长,并将其亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞NIH3T3细胞中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。最后利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-β-catenin在NIH3T3细胞内的定位。结果β-catenin基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为2346 bp,并测序成功。Western blot检测到了GFP-β-catenin融合蛋白表达,分子量约为115kDa。pEGFP-β-catenin在工具细胞NIH3T3细胞中主要定位于细胞膜和细胞质。结论成功构建了β-catenin基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-β-catenin蛋白在NIH3T3细胞中主要定位于细胞膜和细胞质。

• 单位
  中国医科大学; 中国医科大学附属盛京医院; 基础医学院