人骨形态发生蛋白2真核表达载体构建及其基因/壳聚糖纳米复合体制备

作者：杨晓喻; 李世轶; 张迪; 吴颖; 杨涛; 刘长虹

来源：华西口腔医学杂志, 2014, 32(05): 493-497.

• 人骨形态发生蛋白2
• 真核表达载体
• 壳聚糖
• 纳米复合体

目的构建人骨形态发生蛋白(BMP)2的真核表达型载体,并利用其与壳聚糖制备纳米复合体。方法体外利用双酶切法将pMD18T-hBMP2-His质粒与pIRES2-EGFP真核表达载体连接,构建pIRES2-EGFP-hBMP2-His真核表达载体;采用5种不同相对分子质量及脱乙酰度的壳聚糖,通过去溶剂法在不同N/P比(壳聚糖中的胺基含量与质粒中磷酸基含量的摩尔比)情况下制备壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体。ZetaPALS电位及粒度分析仪检测纳米复合体的粒径大小、分布及Zeta电位,琼脂糖凝胶电泳分析及荧光分光法评定壳聚糖对pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体的包裹情况,原子力显微镜观察粒径形貌。结果 1)成功构建pIRES2-EGFP-hBMP2-His真核表达载体,并经酶切、测序证实;2)成功制备壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体,壳聚糖对pIRES2-EGFP-hBMP2-His质粒具有包裹作用;3)制备的壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His复合体呈球状,粒径为111.73 214.2 nm,Zeta电位为4.9316.79 mV。结论壳聚糖可与pIRES2-EGFP-hBMP2-His复合形成纳米微粒。

• 单位
  广东省口腔医院; 南方医科大学