酶联免疫斑点法检测乙型肝炎病毒感染者抗原表位特异性细胞毒性T淋巴细胞

作者：张海萍; 闫惠平; 张永宏; 冯霞; 赵艳; 廖慧玉; 刘燕敏; 陈煜; 檀玉芬; 刘妍

来源：中华预防医学杂志, 2009, (08): 690-694.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2009.08.011

• 抗原,表面
• 肝炎,乙型,慢性
• T淋巴细胞,细胞毒性
• 核酸扩增技术

目的通过观察乙型肝炎病毒(HBV)特异性细胞毒性T细胞(CTL)抗原表位肽刺激外周血单个核细胞(PBMC)产生γ扰素(IFN-γ)的能力,分析不同类型HBV感染人群特异性CTL免疫应答差异。方法合成4条人类白细胞抗原(HLA)-A2限制性HBV特异性CTL抗原表位肽[分别为多聚酶P的575-583序列FLLSLGIHL(Tp),HBsAg28-39序列IPQSLDSWWTSL(Te1),HBsAg183-191序列FLLTRILTI(Te2)和HBcAg18-27序列FLPSDFFPSV(Tc)]。流式细胞术鉴定HLA基因表型。用合成的CTL表位肽分别刺激慢性乙型肝炎组(CHB)、慢性乙型重型肝炎组(CSH),既往HBV感染者(N1)组和健康献血员(N2)的PBMC,采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测分泌IFN-γ的CTL细胞的频率。结果 (1)HLA-A2基因分布频率:44例CHB组为45.5%(20/44),18例CSH组为55.6%(10/18),10例N1组为60%(6/10),10例N2组全部选择以往研究已确定的HLA-A2阳性者。(2)ELISPOT检测结果 :①4条HBV特异性抗原多肽反应阳性率在CHB组、CSH组、N1组和N2组分别为50%(10/20)、10%(1/10)、83.3%(5/6)和10%(1/10)。N1组反应阳性率高于CSH组(χ~2=9.000,P=0.008)和N2组(χ~2=9.000,P=0.008)。②各组对Tp、Te1、Te2和Tc四条肽的平均反应强度用斑点形成细胞(SFC)/10~6PBMC表示,采用非参数秩和检验,N1组对Tp、Te1、Te2和Tc肽的平均反应强度大于CSH组和N2组(分别为77 SFC/10~6PBMC vs 10 SFC/10~6PBMC vs 15 SFC/10~6PBMC,59 SFC/10~6PBMC vs 0 SFC/10~6 PBMC vs 0 SFC/10~6PBMC,100 SFC/10~6PBMC vs 0 SFC/10~6PBMC vs 22 SFC/10~6PBMC和57 SFC/10~6PBMC vs 20 SFC/10~6PBMC vs 30 SFC/10~6PBMC,均P<0.01)。结论各种类型HBV感染者不论病毒清除与否,都可对HBV特异性多肽产生T细胞免疫反应,这种免疫反应以既往感染者最强,慢性乙型肝炎组较弱,慢性乙型重型肝炎组缺乏,提示HBV特异性CTL应答可能是自身免疫机制清除病毒的重要因素。

• 单位
  首都医科大学附属北京佑安医院