积雪草对转染TGF-β1基因的大鼠肾小球系膜细胞Smad 2/3、Smad 7和胶原蛋白Ⅳ表达的影响

作者：马继伟; 王宏天; 刘浩飞; 董磊鹏; **; 白继琼; 张翥; 东莉洁

来源：中国应用生理学杂志, 2018, 34(02): 122-149.

• 大鼠
• 糖尿病肾病
• 积雪草
• 转化生长因子-β1
• Smad信号通路
• 胶原蛋白Ⅳ

目的:通过细胞转基因技术,获得稳定表达转化生长因子β1(TGF-β1)的系膜细胞(MC)克隆,观察积雪草(CA)对Smad 2/3、Smad 7和胶原蛋白1V表达及Smad 2/3磷酸化的影响。方法:采用脂质体的方法将TGF-β1表达质粒转入MC细胞,采用G418筛选并建立稳定表达TGF-β1的细胞株。将MC细胞株分为3组:对照组(未转染TGF-β1的MC+RPMI 1640+10%正常大鼠血清),TGF-β1转染组(稳定表达TGF-β1的MC+RPMI 1640+10%正常大鼠血清),积雪草(CA)组:稳定表达TGF-β1的MC+RPMI 1640+10%含高浓度CA的大鼠血清。实验重复5次。ELISA法检测各组培养上清中TGF-β1和胶原Ⅳ的含量;RT-PCR方法检测各组细胞TGF-β1、Smad 2/3、Smad7的mRNA表达水平;Western印迹法检测各组细胞TGF-β1、Smad 2/3、p-Smad 2/3、Smad 7、胶原Ⅳ的蛋白质水平。结果:TGF-β1转染组细胞上清液中的TGF-β1和胶原蛋白Ⅳ水平显著升高,积雪草能显著降低TGF-β1和胶原蛋白Ⅳ水平;TGF-β1转染组细胞中TGF-β1、Smad 2/3的mRNA和蛋白质表达水平及Smad 2/3的磷酸化水平均显著升高,而CA可显著降低MC细胞中TGF-β1、Smad 2/3的mRNA和蛋白质表达水平及Smad 2/3的磷酸化水平;TGF-β1转染组细胞中的Smad 7 mRNA水平显著降低,而CA能使Smad 7的mRNA水平显著升高。结论:稳定表达TGF-β1的MC细胞能激活TGF-β1/Smad信号通路,并引起胶原蛋白Ⅳ表达增加,而CA通过抑制此通路的激活,进而抑制胶原蛋白Ⅳ的表达而减缓糖尿病肾病(DN)的发生。

• 单位
  信阳市中心医院; 巩义市人民医院; 河南中医药大学; 天津医科大学眼科医院