弓形虫GRA6-GRA2蛋白表达及检测应用

作者：张宁; 刘伟; 吴铭洁; 夏霖亚; 王蕾; 殷玉和; 石晶; 吴丛梅^*

来源：中国动物传染病学报, 2023, 31(03): 91-98.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.2023.03.014

• 弓形虫
• 抗原
• GRA6-GRA2蛋白

为建立一种敏感性好、特异性强、方便快捷的检测猫弓形虫抗体的方法，本研究通过分子生物学方法、优化合成了GRA1-GRA7、SAG1和GRA6-GRA2基因，采用大肠杆菌ER2566表达了GRA1-GRA7、SAG1和GRA6-GRA2三种蛋白；表达产物利用His亲和层析柱纯化后，经Western blot鉴定三种蛋白表达产物都有较好的抗原特异性；通过ELISA方法进行检测比较，确定GRA6-GRA2蛋白敏感性最高；以GRA6-GRA2蛋白作为标记抗原，制备弓形虫抗体检测试纸条，分别对敏感性对照阳性血清、特异性对照血清进行检测，并与弓形虫抗体间接血凝法对289份临床血清进行对比检测。结果表明：检测敏感性对照阳性血清可检测至1∶256，检测临床常见的猫细小病毒阳性血清、猫杯状病毒阳性血清和猫疱疹病毒阳性血清结果均为阴性；在弓形虫抗体检测试纸条和弓形虫抗体间接血凝法对289份临床血清的对比检测中，阳性率分别为2.42%和2.07%，符合率为99.5%。通过以上结果可知，采用GRA6-GRA2蛋白作为诊断抗原制备的胶体金试纸，具有良好的敏感性和特异性，为弓形虫病的快速诊断提供了切实可行的检测手段。

• 单位
  生命科学学院; 长春工业大学