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摘要
为明确NfMIT3对植物内源激素独脚金内酯（strigolactones， SLs）的生物合成及对青天葵（Nervilia fordii （Hance） Schltr.）分枝发育的影响，本研究基于青天葵转录组数据，筛选到位于独脚金内酯（strigolactones， SLs）生物合成通路上游的类胡萝卜素异构酶CRTISO的Unigene序列，将其命名为NfMIT3，利用RACE技术克隆全长cDNA序列，对该基因的生物信息学、亚细胞定位、原核表达情况和表达模式进行分析。结果表明，NfMIT3基因cDNA全长2 271 bp，开放阅读框（ORF）为1 861 bp，编码一个具有603个氨基酸的NfMIT3蛋白，在线软件Expasy推测NfMIT3蛋白相对分子量为66.587 kDa，蛋白理论等电点为8.56；总平均亲水性为-0.015，为不稳定的亲水性蛋白，无信号肽及切割位点，无跨膜结构域，属于NADB＿Rossmann 超家族。WoLF PSORT预测其定位于叶绿体，与亚细胞定位实验结果一致。蛋白的二级结构中以α-螺旋占比最高，占40.13%；利用同源建模进行三级结构预测，结果表明青天葵与水稻、拟南芥MIT3基因编码的氨基酸序列具有较高的同源性；系统进化树分析显示NfMIT3与兰科植物铁皮石斛和桃红蝴蝶兰等聚为一支。NfMIT3在叶片中相对表达量最高，并对其成功进行了原核表达分析。本研究为进一步探讨该基因的功能、明确其对下游植物激素独脚金内酯合成的影响及在植物分枝发育中的作用奠定了基础。
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