携带 ABCA3突变的肺表面活性物质代谢障碍患儿的诱导多能干细胞系构建

作者：田智琛; 谢欣; 池婧涵; 陈佳; 赵丹华; 贺艳梅; 尹晓娟

来源：中华实用儿科临床杂志, 2024, 39(2): 98-103.

DOI：10.3760/cma.j.cn101070-20230516-00384

• 婴儿，新生
• 呼吸窘迫综合征
• 腺苷三磷酸结合盒转运子A3
• 诱导多能干细胞
• 外周血单核细胞

目的:利用携带腺苷三磷酸结合盒转运子A3( ABCA3)复合杂合突变的新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)患儿的外周血单核细胞(PBMCs)，建立符合研究需求的诱导多能干细胞(iPSCs)细胞系。 方法:细胞实验研究。采集患儿的外周静脉血并分离出PBMCs，体外培养，用携带重编程因子的非整合性仙台病毒载体转染PBMCs，对所产生的iPSCs细胞系进行染色体核型分析。采用免疫荧光技术、流式细胞术检测干细胞多能性标志物、验证其分化潜能，采用Sanger测序对基因突变进行分析，另外还行短串联重复序列(STR)位点分析，聚合酶链式反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳法检测病毒残留。结果:对建立的iPSCs细胞系行核型分析显示为正常的二倍体46，XY核型，免疫荧光技术显示干细胞多能性标志物OCT4、SSEA4、Nanog及Sox2染色呈阳性。流式细胞术检测干细胞多能性标志物，显示TRA-1-60、SSEA-4和OCT4的表达。诱导向三胚层分化后用免疫荧光技术对外胚层(PAX-6)、中胚层(Brachyury)和内胚层(甲胎蛋白)标志物进行免疫荧光染色，结果显示均为阳性。Sanger测序显示c.3997_3998del及c.3137C>T复合杂合突变。STR位点分析结果显示其来源于患儿PBMCs，PCR和琼脂糖凝胶电泳法未检测到仙台病毒残留。结论:本研究用 ABCA3复合杂合突变患儿的PBMCs建立了iPSCs细胞系，为 ABCA3基因突变所致的NRDS发病机制的研究、治疗药物筛选及细胞治疗奠定了基础。