腺病毒介导的东亚钳蝎氯毒素对人胶质瘤U251细胞的作用

作者：陈良崇; 胡涛^*; 周浪浪; 黄瑞; 刘**; 郭慧敏; 陈胜利

来源：肿瘤研究与临床, 2021, 33(04).

• 神经胶质瘤
• 腺病毒科
• 蝎毒素
• 细胞周期
• 细胞凋亡
• 氯化物通道

目的探讨腺病毒介导的人工合成东亚钳蝎氯毒素(Ad-rBmK CTa)对人胶质瘤U251细胞的抑制作用及其相关机制。方法设置3.5×109、7.0×109、3.5×1010pfu/ml三个效价梯度Ad-rBmK CTa组, 分别作用于U251细胞24、48、72 h, 同时设置空白对照组(不加入细胞和Ad-rBmK CTa)、阴性对照组(只加入U251细胞)。通过激光共聚焦荧光显微镜观察病毒感染情况;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖情况;采用流式细胞术检测各组细胞周期及细胞凋亡;采用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2和caspase-3表达情况。结果 Ad-rBmK CTa作用于U251细胞24 h后感染效率达90%以上。随着Ad-rBmK CTa效价升高, 作用相同时间的U251细胞增殖抑制率逐渐升高(均P<0.01);随着时间延长, 同一效价Ad-rBmK CTa作用的U251细胞增殖抑制率亦逐渐升高(均P<0.01)。7.0×109 pfu/ml Ad-rBmK CTa作用于U251细胞48 h后, G0/G1期细胞比例为(40.7±0.8)%, S期和G2期细胞比例分别为(35.7±0.6)%、(23.6±1.4)%, 差异具有统计学意义(F=225.119, P<0.01)。7.0×109 pfu/ml Ad-rBmK CTa作用于U251细胞24、48、72 h时, 细胞凋亡率分别为(7.4±1.4)%、(19.2±1.7)%和(22.3±1.7)%, 差异有统计学意义(F=49.470, P<0.01)。7.0×109 pfu/ml Ad-rBmK CTa作用于U251细胞48 h后, 与阴性对照组相比, bax、caspase-3蛋白的表达水平升高, bcl-2蛋白表达水平下降。结论 Ad-rBmK CTa可能作用于DNA损伤诱导的G1/S检测点, 使细胞周期停滞于G0/G1期, 从而抑制U251细胞的体外增殖, 但其诱导U251细胞凋亡的作用并不明显。其机制可能与氯离子-通道直接或间接受到抑制相关。

• 单位
  山西医科大学; 山西省儿童医院; 山西省人民医院