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摘要
采用基因挖掘技术,从NCBI数据库发现来源于Glaciecola polaris的葡萄糖3-脱氢酶基因,该基因经密码子优化后合成,构建p ET28b-GpG3DH重组表达载体,转入大肠杆菌E. coli BL21中进行重组表达,结果显示:GpG3DH实现了部分可溶表达,其分子量为5. 5×104。随后,优化了GpG3DH的表达条件,结果发现,重组菌在TB培养基中37℃培养至OD600为0. 8时,加入IPTG至终浓度为0. 5 mmol/L,16℃诱导表达10 h,GpG3DH酶活为2. 83×10-2U/m L。进一步将重组菌用于3-酮对硝基苯井冈霉胺的细胞转化法合成,细胞用10 mmol/L的EDTA处理,在p H为7. 5、25℃的条件下转化32 h,3-酮对硝基苯井冈霉胺的产率(Y3-KpNPV)为0. 54。
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单位浙江树人学院
