大鼠Pdcd4基因真核载体的构建与表达

作者：钟波^*; 李静; 吕社民; 侯伟; 刘海燕; 金巧艳; 魏伟

来源：医学研究杂志, 2019, 48(10): 58-62.

DOI：10.11969/j.issn.1673-548X.2019.10.014

• 程序性细胞死亡因子4
• 基因重组
• pEGFP-C1载体
• 支气管哮喘

目的构建大鼠程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4,Pdcd4)基因真核表达载体,为进一步研究该基因的功能提供条件。方法提取E3大鼠肺组织总RNA,RT-PCR扩增大鼠Pdcd4基因全长c DNA;经过双酶切、连接等反应,构建p EGFP-C1-Pdcd4重组表达载体。将该载体转染大鼠巨噬细胞系NR8383细胞,通过RT-q PCR与Western blot法检测NR8383细胞Pdcd4基因的表达。结果 RT-PCR扩增的大鼠Pdcd4全长c DNA为1410bp; p EGFP-C1-Pdcd4重组真核表达载体中插入片段与NCBI Gen Bank文库中大鼠Pdcd4 c DNA的序列完全一致;倒置荧光显微镜下观察转染后NR8383细胞中绿色荧光蛋白的表达确定转染成功; RT-q PCR与Western blot法检测NR8383细胞中Pdcd4基因的表达水平明显上调。结论成功构建p EGFP-C1-Pdcd4重组真核表达载体,为进一步研究Pdcd4基因的作用机制奠定基础。

• 单位
  西安交通大学; 基础医学院