C6orf120基因敲除对刀豆蛋白A诱导的自身免疫性肝炎大鼠中性粒细胞和巨噬细胞的影响

作者：吴苑妮; 张瑞; 韩晓旭; 宋心成; 高美欣; **; 李鑫^*

来源：中国肝脏病杂志(电子版), 2021, 13(01): 59-67.

• C6orf120
• 自身免疫性肝炎
• 中性粒细胞
• 巨噬细胞

目的探讨功能未知基因C6orf120缺失对刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)大鼠中性粒细胞和巨噬细胞的影响。方法抽取野生型(wild type,WT)大鼠和C6orf120基因敲除型(C6orf120~(-/-))大鼠各24只,随机分成未经Con A诱导组、Con A诱导12 h组和Con A诱导24 h组共3组,每组中WT大鼠和C6orf120~(-/-)大鼠各8只。其中Con A诱导12 h组和Con A诱导24 h组大鼠以Con A 35 mg/kg舌下静脉注射建立AIH大鼠模型,于Con A诱导12 h和24 h后分别处死。检测大鼠血浆丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平;采用流式细胞术检测大鼠外周血、肝、脾、肠系膜淋巴结中中性粒细胞和巨噬细胞的比例;采用全自动五分类血球分析仪检测大鼠全血中性粒细胞比例。结果未经Con A诱导组WT大鼠与C6orf120~(-/-)大鼠血浆ALT [(57.03±16.39)U/L vs (55.82±12.35)U/L]和AST [(99.94±18.56)U/L vs(110.86±21.84)U/L]水平差异无统计学意义(t=0.244、-1.616,P=0.809、0.115)。Con A诱导12 h组WT大鼠ALT [(494.27±250.41)U/L vs(206.44±98.66)U/L]和AST [(2043.42±1618.09)U/L vs(777.22±383.95)U/L]水平均显著高于C6orf120~(-/-)大鼠,差异有统计学意义(t=4.445、3.216,P=0.001、0.016)。Con A诱导24 h组WT大鼠与C6orf120~(-/-)大鼠血浆ALT [(196.31±76.10)U/L vs(211.63±83.28)U/L]和AST [(892.88.42±354.95)U/L vs(931.44±397.92)U/L]水平差异无统计学意义(t=-0.384、-0.205,P=0.707、0.841)。与未经Con A诱导组相比,Con A诱导12 h和24 h组WT大鼠和C6orf120~(-/-)大鼠血浆ALT与AST水平均显著升高(P均≤0.001);与Con A诱导12 h组相比,Con A诱导24 h组WT大鼠血浆ALT与AST水平均显著降低(P均≤0.001),C6orf120~(-/-)大鼠血浆ALT与AST水平差异均无统计学意义(P均> 0.05)。未经Con A诱导组、Con A诱导12 h组和Con A诱导24 h组C6orf120~(-/-)大鼠全血中性粒细胞百分比均显著高于WT大鼠[未经Con A诱导组:(21.57±3.88)%vs(10.63±3.34)%;Con A诱导12 h组:(69.26±2.36)%vs(55.80±6.34)%;Con A诱导24 h组:(24.57±3.76)%vs(13.09±3.45)%],差异有统计学意义(t=-6.042、-4.136,-5.513,P均≤0.001)。未经Con A诱导组C6orf120~(-/-)大鼠外周血[(33.24±9.80)%vs(13.77±5.33)%]和脾脏[(8.96±2.65)%vs(4.32±0.92)%]中性粒细胞比例均显著高于WT大鼠(t=-6.049、-5.941,P均<0.001);肝脏[(20.85±5.74)%vs(19.25±4.93)%]和肠系膜淋巴结[(0.95±0.26)%vs(0.88±0.45)%]中性粒细胞比例差异无统计学意义(t=-0.701、-0.466,P=0.491、0.646)。Con A诱导12 h组和24 h组C6orf120~(-/-)大鼠外周血[12 h:(59.16±11.72)%vs(39.31±5.88)%;24 h:(50.16±5.95)%vs(38.99±5.91)%]和肝脏[12 h:(33.43±6.47)%vs(25.20±3.92)%;24 h:(23.23±4.36)%vs(14.34±2.30)%]中性粒细胞比例均显著高于WT大鼠(P均<0.05),肠系膜淋巴结[12 h:(0.33±0.10)%vs(0.45±0.20)%;24 h:(0.53±0.13)%vs(0.43±0.15)%]和脾脏[12 h:(11.39±4.47)%vs(8.55±5.07)%;24 h:(12.22±2.11)%vs(8.69±5.13)%]中性粒细胞比例差异无统计学意义(P均>0.05)。3组间WT大鼠和C6orf120~(-/-)大鼠外周血、肝脏、肠系膜淋巴结及脾脏中性粒细胞比例差异均有统计学意义(P均<0.001)。未经Con A诱导组C6orf120~(-/-)大鼠外周血[(2.21±0.78)%vs(4.02±1.23)%]、肝脏[(3.18±0.62)%vs(6.72±1.37)%]、肠系膜淋巴结[(4.28±1.25)%vs(7.18±2.21)%]和脾脏[(5.42±0.55)%vs(10.19±1.35)%]巨噬细胞比例均显著低于WT大鼠(t值分别为4.291、7.797、3.919、11.388,P均≤0.001)。Con A诱导12 h和24 h组C6orf120~(-/-)大鼠肠系膜淋巴结中巨噬细胞比例[12 h:(34.45±8.05)%vs(14.13±6.18)%;24 h:(19.95±6.44)%vs(11.35±1.96)%]显著高于WT大鼠(t=-5.664,P <0.001;t=4.222,P=0.001),外周血[12 h:(17.63±3.69)%vs(22.55±4.73)%;24 h:(21.08±5.73)%vs(18.28±7.84)%]、肝脏[12 h:(24.81±8.06)%vs(25.88±9.91)%;24 h:(9.11±2.84)%vs(9.98±2.55)%]和脾脏[12 h:(15.56±8.16)%vs(13.89±6.23)%;24 h:(18.39±4.08)%vs(18.70±1.88)%]巨噬细胞比例差异无统计学意义(P均> 0.05)。3组间WT大鼠和C6orf120~(-/-)大鼠外周血、肝脏、肠系膜淋巴结及脾脏巨噬细胞比例差异均有统计学意义(P均<0.001)。结论 C6orf120基因敲除可促进中性粒细胞增殖而抑制巨噬细胞增殖。在Con A诱导的大鼠AIH中,C6orf120基因缺失对肝损伤具有保护作用,其机制可能与中性粒细胞和巨噬细胞的免疫调节作用有关。

• 单位
  青岛市市立医院; 首都医科大学附属北京地坛医院; 北京大学