神经氨酸酶-1在尤文肉瘤组织中的表达及其对肉瘤细胞增殖、迁移能力的影响

作者：刘斌峰; 高延征^*

来源：中华医学杂志, 2023, 103(41).

• 肉瘤, Ewing
• 神经氨酸酶-1
• 基因表达
• 预后

目的探讨神经氨酸酶-1(NEU1)在尤文肉瘤(ES)组织中的表达及其对ES细胞增殖、迁移能力的影响。方法通过美国国家医学图书馆的国家生物技术信息中心高通量基因表达(GEO)数据库下载ES患者数据集以分析NEU1在ES中的表达;从国际癌症基因组联盟(ICGC)获取了ES患者数据并采用Kaplan-Meier生存分析探索NEU1与ES患者预后的关系;采用单、多因素Cox回归分析判断NEU1是否为ES的预后影响因素;采用京都基因与基因组百科全书(KEGG)注释分析NEU1在调控ES恶性生物学行为的潜在机制;采用实时荧光定量聚核酶链反应(RT-qPCR)验证NEU1在人骨髓间充质干细胞(hBMSC)及人ES细胞系RD-ES中的表达情况;采用转染技术敲减ES细胞系RD-ES中NEU1的表达, 并将ES细胞系分为shRNA-NEU1和shRNA-NC两组探索NEU1表达水平改变对ES恶性生物学行为的影响;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测和细胞克隆形成实验检测两组细胞增殖能力;采用划痕实验检测两组细胞迁移能力。结果从GEO数据库中检索并下载GSE17674和GSE17679数据集, 其中GSE17674包含44例ES组织和18例正常组织, GSE17679包含87例ES组织和18例正常组织, 随后通过分析发现NEU1在ES中的表达水平高于正常对照组织(P<0.001)。从ICGC数据库获取了56例ES患者完整的基因表达数据集和相应的临床信息, 进一步通过生存分析发现NEU1高表达组(n=28)中ES患者在不同时间点的总生存率低于NEU1低表达组(n=28)(HR=2.830, 95%CI:1.324～6.051, P=0.005)。单因素分析结果显示NEU1可影响ES患者预后(HR=1.049, 95%CI:1.008～1.092, P=0.019), 而多因素分析结果进一步提示NEU1可作为ES预后评估的风险因素(HR=1.087, 95%CI:1.028～1.148, P=0.003)。KEGG结果显示MAPK信号通路、细胞黏附分子信号通路是调控ES的恶性进程潜在机制。RT-qPCR结果表明NEU1在RD-ES细胞系中的表达水平高于对照细胞hBMSC(2 184.23±527.32比1.00±0.08, P<0.001)。CCK-8实验结果显示NEU1敲低组的RD-ES细胞在24、48及72 h的增殖数量均低于对照组(分别为0.494±0.126比0.696±0.118、0.657±0.096比1.142±0.182、1.053±0.064比1.980±0.146, 均P<0.001)。单细胞克隆形成实验结果显示低表达NEU1组细胞的集落形成数量低于对照组(184.2±123.9比362.8±78.0, P=0.021)。细胞划痕愈合实验发现, NEU1敲低组的平均划痕距离低于对照组(19.6%±5.7%比56.0%±7.6%, P<0.001)。结论 NEU1可能是ES的预后影响因素, 其在ES中表达异常可影响ES细胞的增殖、迁移能力, 从而导致ES患者的不良预后。

• 单位
  郑州大学; 河南省人民医院; 河南大学