重组酶聚合酶扩增技术在流感病毒检测中的探索性研究

作者：孙宁; 于娟; 严孝岭; 高德玉; 陈波; 王卫萍; 李晓军^*

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2019, (05).

• 流感病毒
• 检测
• 分型
• 重组酶聚合酶扩增

目的 建立和评估反转录酶-重组酶聚合酶扩增(reverse transriptase－recombinase polymerase amplification,RT－RPA)技术在流感病毒检测中的应用。方法 分别以甲型流感病毒基质蛋白(matrix)基因、血凝素(HA)基因,以及乙型流感病毒非结构蛋白(NS)基因为靶标基因,设计引物,建立流感病毒检测和亚型(H1、H3)鉴定的RT-RPA方法,并分析该方法的特异性和灵敏性。结果 所建立的流感病毒RPA检测方法仅对相应靶基因出现特异性扩增产物,对其他呼吸道病毒均无扩增,表明该方法特异性较高。利用上述方法检测流感病毒的检测限均为100拷贝/μl。SYBR Green I可与RT-RPA相结合检测乙型流感病毒,最低检测限为100拷贝/μl。结论 初步证实了利用RPA方法检测流感病毒的可行性。

• 单位
  东南大学附属中大医院; 南京军区南京总医院; 宁波海尔施基因科技有限公司