SIRT1/NF-κB通路在氧糖剥夺再灌注诱导小鼠海马神经元损伤中的作用

作者：姚鹏; 陈勇; 徐国海^*

来源：中国急救医学, 2019, 39(04): 382-387.

• 氧糖剥夺再灌注损伤
• 沉默信号调节因子1
• 细胞核因子-κB
• 海马神经元

目的探讨沉默信号调节因子1(SIRT1)/细胞核因子-κB(NF-κB)信号通路在氧糖剥夺再灌注诱导海马神经元损伤中的作用。方法通过SIRT1过表达慢病毒和RNAi技术调控小鼠海马神经元SIRT1的表达后建立氧糖剥夺再灌注损伤模型,实验设置七组:对照组(Control组)、氧糖剥夺再灌注损伤模型组(OGD组)、OGD+转染SIRT1-siRNA质粒组(OGD+SIRT1-siRNA组)、OGD+转染空载质粒组(OGD+NC-siRNA组)、OGD+感染过表达SIRT1慢病毒组(OGD+SIRT1上调组)、OGD+感染空载慢病毒组(OGD+Vector组)及OGD+SIRT1上调+SIRT1-siRNA组。对照组在37℃常氧条件下培养,其余六组在经过相应处理后给予氧糖剥夺处理9 h及再灌注处理24 h,再灌注处理结束后采用CCK-8法测定细胞活力、化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量、流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光定量PCR法检测SIRT1、NF-KB的mRNA表达量,Western blot检测SIRT1、NF-κB、IκBα、Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、β-actin、TBP的表达量。结果与Control组比较,OGD组细胞活力(%:100 vs.53.83±1.88)、SIRT1蛋白表达量(0.62±0.06 vs.0.33±0.03),IκBα蛋白表达量(1.01±0.06 vs.0.42±0.03)、Bcl-2/Bax比值(2.64±0.34 vs.0.58±0.06)明显降低(P<0.05),LDH释放量(U/mL:1.12±0.17 vs.2.76±0.23),细胞凋亡率(%:8.46±1.77 vs.29.58±1.84),NF-κB蛋白表达量(0.23±0.03 vs.0.63±0.03),Cleaved caspase-3蛋白表达量(0.19±0.03 vs.0.82±0.04)明显升高(P<0.05);与OGD组和OGD+Vector组比较,OGD+SIRT1上调组细胞活力(%:53.83±1.88、50.33±3.83 vs.72.77±1.80)、SIRT1表达量(0.63±0.03、0.58±0.04 vs.1.02±0.05)、IκBα表达量(0.42±0.03、0.38±0.04 vs.0.62±0.04)及Bcl-2/Bax比值(0.58±0.06、0.55±0.04 vs.1.41±0.16)明显升高(P<0.05),LDH释放量(U/mL:2.76±0.23、2.91±0.25 vs.1.95±0.20)、细胞凋亡率(%:29.58±1.84、28.87±2.91 vs.20.61±2.81)%、NF-KB表达量(0.63±0.03、0.58±0.04 vs.0.35±0.04)、Cleaved caspase-3表达量(0.82±0.04、0.71±0.05 vs.0.46±0.04)明显降低(P<0.05);与OGD组和OGD+NC-siRNA组比较,OGD+SIRT1-siRNA组细胞活力(%:53.83±1.88、49.23±3.12 vs.34.86±3.17)、SIRT1表达量(0.33±0.03、0.32±0.04vs.0.18±0.04)、IκBα表达量(0.42±0.03、0.46±0.05 vs.0.27±0.04)及Bcl-2/Bax比值(0.58±0.06、0.62±0.05 vs.0.15±0.02)明显降低(P<0.05),LDH释放量(U/mL:2.76±0.23、2.78±0.24 vs.3.51±0.31)、细胞凋亡率(%:29.58±1.84、28.52±2.08 vs.37.03±3.19)、NF-κB表达量(0.63±0.03、0.64±0.04 vs.0.93±0.05)、Cleaved caspase-3表达量(0.82±0.04、0.85±0.05 vs.1.12±0.13)明显升高(P<0.05)。结论 SIRT1/NF-κB通路参与了氧糖剥夺再灌注诱导小鼠海马神经元损伤过程。

• 单位
  南昌大学第二附属医院