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摘要
背景：培养神经元的质量是研究中枢神经系统疾病的关键所在，但培养方法一直没有统一的标准。目的：探究取材部位及阿糖胞苷处理对原代培养神经元活性、纯度及成熟度的影响。方法：选取新生24 h内的SD乳鼠，取大脑皮质表面2.0-3.0 mm处细胞，培养后24,48,72 h，用5μmol/L或10μmol/L阿糖胞苷处理48 h；另取全部大脑皮质细胞，培养后48 h用5μmol/L阿糖胞苷处理48 h。培养至第7天，倒置显微镜下观察细胞形态，采用CCK-8法检测阿糖胞苷对神经元活性的影响，免疫荧光和Western blot检测神经元的纯度及成熟度。结果与结论：（1）倒置显微镜：10μmol/L阿糖胞苷24,48,72 h组神经元密度分别低于同时间下的5μmol/L阿糖胞苷组，该6组神经元突起相互之间均可连接成紧密的网状结构，神经元胞体丰满并充满折光特性；全皮质组细胞密度低于正常对照组，并可明显观察到非神经元；（2）CCK-8检测：各阿糖胞苷组细胞活性均低于正常对照组（P <0.001）, 10μmol/L阿糖胞苷24,48,72 h组神经元活性低于同时间下的5μmol/L阿糖胞苷组（P <0.05）,5μmol/L阿糖胞苷24 h组神经元活性低于5μmol/L阿糖胞苷48,72 h组（P <0.01）;（3）免疫荧光染色：各阿糖胞苷组神经元纯度大于正常对照组、全部皮质组（P <0.001），各阿糖胞苷组神经元纯度无差异；（4）Western blot检测神经元特异性烯醇化酶蛋白表达：各阿糖胞苷组神经元成熟度高于正常对照组（P <0.05），其中以5μmol/L阿糖胞苷48 h组成熟度最高；（5）结果表明：取新生24 h内大鼠大脑皮质表面2.0-3.0 mm处皮质，培养后48 h加入5μmol/L阿糖胞苷处理得到的神经元活性、成熟度和纯度较好。
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