siRNA干扰对鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF57基因表达的影响

作者：金李萍; 潘晓艺; 蔺凌云; 姚嘉赟; 曹铮; 尹文林; 赖迎迢; 陶家发; 刘忆瀚; 沈锦玉^*

来源：水生生物学报, 2022, 46(04): 537-544.

• 鲤疱疹病毒Ⅱ型
• RNA干扰
• ORF57
• 小干扰RNA
• 异育银鲫脊髓细胞系
• TCID50

研究通过在异育银鲫脊髓细胞系(Spinal cord tissue cell lines of Carassius auratus gibelio, CSC)中对鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2, CyHV-2) ORF57进行RNA干扰,以探究其对CyHV-2病毒复制的影响。首先,以FAM标记的异育银鲫β-actin的siRNA进行CSC细胞转染条件的优化,再将针对CyHV-2 ORF57基因设计的3条siRNA,转染CSC细胞,并进行病毒感染,评估siRNA对病毒复制和致细胞病变的影响。转染条件优化结果显示,在siRNA浓度为80 nmol/L,转染液维持24h后更换维持液, β-actin基因表达量最低且观察到的荧光点数量最多。而ORF57-siRNAs干扰结果显示, ORF57-siRNA-2组表现出了较强的抑制效果,在接毒48h时,ORF57-siRNA-2处理组的ORF57基因表达量降到相对于Mock组的33.55%(P<0.01),并且各ORF57-siRNA组都表现出了延缓CyHV-2致细胞病变的时间和强度,抑制时间可达120h。TCID50结果显示,不同组的ORF57-siRNAs均能降低病毒滴度,其中ORF57-siRNA-2将病毒原液TCID50 108.487/mL下降至106.776/mL。研究结果表明,干扰ORF57的表达可大大降低CyHV-2的致细胞病变力和复制率, ORF57在CyHV-2复制与致细胞病变中起重要作用。本研究为CyHV-2基于siRNA技术的抗病毒治疗和弱毒株的改造提供了借鉴。

• 单位
  中国水产科学研究院珠江水产研究所; 浙江省淡水水产研究所; 生命学院; 上海海洋大学