miR-23b转染宫颈癌干细胞顺铂化疗敏感性变化及其机制

作者：凌芳; 沈慧玲^*

来源：山东医药, 2018, 58(47): 6-10.

• 微小RNA
• 微小RNA-23b
• 宫颈癌干细胞
• 顺铂
• 乙醛脱氢酶1A1

目的观察微小RNA-23b(miR-23b)转染对宫颈癌干细胞(CD133+Ca Ski细胞)顺铂(CDDP)化疗敏感性的影响,并探讨其机制。方法流式细胞术分选宫颈癌细胞系Ca Ski中的CD133+Ca Ski细胞,荧光定量PCR检测CD133+Ca Ski细胞和宫颈癌非干细胞(CD133-CaSki细胞)中的miR-23b,并预测其靶基因。将CD133+Ca Ski细胞分为mimics组、NC组、空白对照组,mimics组转染miR-23b模拟物(miR-23b mimics),NC组转染miR-23b阴性对照物(miR-23bNC),空白对照组不做任何处理,之后分别加入不同浓度的CDDP,CCK-8法检测CDDP对各组CD133+Ca Ski细胞的半数抑制浓度(IC50)。Western blotting法检测CD133+Ca Ski、CD133-CaSki、转染miR-23b mimics的CD133+Ca Ski细胞中乙醛脱氢酶1A1 (ALDH1A1)蛋白。将人胚胎肾细胞系HEK-293T分为wt组、mut组、空载体组,wt组转染miR-23b mimics、内参质粒SV40、pmir GLO-ALDH1A1-3’-UTR wt(野生型)荧光素酶质粒,mut组转染miR-23b mimics、内参质粒SV40、pmir GLO-ALDH1A1-3’-UTR mut(突变型)荧光素酶质粒,空载体组转染miR-23b mimics、内参质粒SV40、pmir GLO空载体质粒,采用双荧光素酶试验检测各组细胞中转染质粒编码蛋白的萤光强度。结果 CD133+Ca Ski、CD133-Ca Ski细胞中miR-23b的相对表达量分别为0. 29±0. 05、1. 09±0. 14,两者相比,P <0. 01; miR-23b的预测靶基因为ALDH1A1基因。CDDP对mimics组、NC组、空白对照组细胞的IC50分别为(8. 18±1. 02)、(13. 98±1. 48)、(14. 15±1. 27)μg/m L,mimics组与NC组和空白对照组相比,P均<0. 05。CD133+Ca Ski、CD133-Ca Ski、转染miR-23b mimics的CD133+Ca Ski细胞中ALDH1A1蛋白相对表达量分别为0. 29±0. 06、0. 12±0. 03、0. 13±0. 04,ALDH1A1蛋白在CD133+Ca Ski细胞中的相对表达量与CD133-Ca Ski细胞和转染miR-23b mimics的CD133+Ca Ski细胞相比,P均<0. 05。HEK-293T细胞中,wt组、mut组、空载体组转染质粒编码蛋白的萤光强度分别为0. 41±0. 06、1. 12±0. 15、1. 02±0. 15,wt组转染质粒编码蛋白的相对荧光强度与mut组和空载体组相比,P均<0. 05。结论在CD133+Ca Ski细胞中,miR-23b表达水平降低,CDDP的IC50升高,ALDH1A1蛋白表达增加; CD133+Ca Ski细胞转染miR-23b后,CDDP的IC50降低; HEK-293T细胞转染miR-23b后,抑制ALDH1A1基因表达。

• 单位
  江苏大学附属人民医院; 江苏大学附属医院