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摘要
目的 建立基于荧光重组酶聚合酶核酸扩增（recombinase polymerase amplification, RPA）技术快速检测粪样中美洲钩虫卵的方法，并评价其效能，为快速检测粪样中美洲钩虫卵提供技术支撑。方法 根据美洲钩虫的cox1基因序列设计荧光RPA引物及探针并进行筛选，建立荧光RPA检测方法。将美洲钩虫卵基因组DNA稀释至100 pg/μL、10 pg/μL、1 pg/μL、100 fg/μL、10 fg/μL、1 fg/μL、0.1 fg/μL等7个浓度梯度以测定荧光RPA法的最低检出值，利用荧光RPA法检测日本血吸虫、蛔虫、华支睾吸虫、肝片形吸虫DNA样本进行交叉反应实验。采集44例人粪样并进行DNA提取，运用改良加藤厚涂片法（Kato-Katz）、半巢式PCR法、荧光RPA法同时检测，评价荧光RPA法的灵敏度和特异度。结果 建立的荧光RPA法可在20 min内特异性扩增出美洲钩虫cox1基因长度为194 bp的片段，最低检出值为10 fg/μL，与日本血吸虫、蛔虫、华支睾吸虫、肝片形吸虫均无交叉反应。通过对44份人粪便样本进行检测，Kato-Katz法和半巢式PCR法均检出26例阳性样本，荧光RPA法检出27例阳性样本，其中1号样本荧光曲线在反应后期略高于阴性对照，但未出现与阳性对照相似反应趋势，因此判定为疑似阴性样本。荧光RPA法与Kato-Katz法和半巢式PCR法相比，其灵敏度均为100.00%，特异度均为94.44%，检测结果一致性较好（Kappa=0.953>0.75）。结论 荧光RPA法可在短时间内实现对美洲钩虫高效、敏感、特异的检测，有望应用于美洲钩虫感染的监测及预警。
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