ELISA法测定食蟹猴血清中抗PD-1单克隆抗体浓度

作者：高妍; 徐楠楠; 汪宁; 宋兢; 张翠宁; 孙云霞; 李开通^*

来源：药物分析杂志, 2021, 41(04): 666-674.

DOI：10.16155/j.0254-1793.2021.04.13

• 抗PD-1单克隆抗体
• 定量分析
• 抗原捕获间接酶联免疫吸附法
• 方法验证

目的:建立灵敏度高、特异性好且快速的ELISA方法,用以测定食蟹猴血清中的抗PD-1单克隆抗体(代号BGB-A317)浓度。方法:建立间接ELISA方法对BGB-A317进行定量分析。测定原理:包被重组人PD-1,加入稀释的血清样品,之后加入稀释好的辣根过氧化物酶标记的羊抗人Ig G(酶标抗体),再加入TMB底物进行显色和2 mol·L-1硫酸作为终止液,在酶标仪上用双波长读取D450/630 nm值,以标准曲线样品D450/630 nm为纵坐标,以样品浓度为横坐标,进行非线性五参回归运算,得到标准曲线方程,将待测样品D450/630 nm代入方程即可得到待测样品浓度。结果:建立并验证了该ELISA方法,定量范围为3～180ng·m L-1。精密度(板内和板间)均在±15%之内,准确度介于75%～125%;食蟹猴空白血清、样品稀释液和干扰单克隆抗体对BGB-A317在食蟹猴血清中的浓度测定无影响;稀释线性样品的精密度小于20%,准确度介于80%～120%;平行性样品的精密度为小于20%;BGB-A317在食蟹猴血清中室温放置4 h、-70℃以下放置70 d及反复冻融3次后均保持稳定,样品准确度均介于80%～120%。结论:方法学验证表明该间接ELISA方法具有良好的灵敏度、准确度、特异性和可重复性,可用于定量分析食蟹猴血清中BGB-A317的浓度。

• 单位
  北京昭衍新药研究中心股份有限公司