雌激素对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化及微小RNA表达的影响

作者：刘冠琪; 麦志辉; 黄锦华; 陈琳; 陈奇; 陈正; 艾虹

来源：中华口腔医学研究杂志(电子版), 2017, 11(01): 17-24.

DOI：10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2017.01.004

• 雌二醇
• 大鼠
• 间质干细胞
• 成骨分化
• 微小RNA

目的研究雌激素对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)成骨分化以及对微小RNA(miR-20a、miR-29a)表达水平的影响。方法分离培养大鼠BMSC,将细胞分3组分别进行处理,使用完全培养基培养组作为空白对照记为CM,成骨诱导液培养组作为对照记为OM,成骨诱导液+17β雌二醇(E2)培养组作为实验组记为E2。细胞处理第1、5、9天进行碱性磷酸酶(ALP)活性检测;第5、9天,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测成骨相关蛋白如Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨形态发生蛋白2(BMP2)、骨桥蛋白(OPN)的表达情况,定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-20a及mi R29a的表达情况;第19天,茜素红染色检测矿化结节的形成情况。两组数据的结果进行两组独立样本的t检验,两组以上的数据进行单因素方差分析,检验水准为P<0.05。结果处理1 d后,各组ALP活性较低,组间差异无统计学意义(CM1 d:3.49,OM1 d:2.82,E21 d:2.92;F=2.002,P=0.216);5 d后,E2组及OM组ALP活性较1 d时明显提高(E21 d:2.92,E25 d:15.83;t=5.065,P=0.007;OM1 d:2.82,OM5 d:8.38;t=13.39,P=0.0002),5 d时E2的值为OM组的2倍、CM组的4倍,差异有统计学意义(F=13.95,P=0.0055);9 d后,各组ALP活性水平有明显增高(CM9 d:14.66,OM9 d:22.17,E29 d:45.99),约为5 d时的3倍(CM:t=11.830,P=0.0003;OM:t=8.068,P=0.0013;E2:t=9.332,P=0.0007),组间差异变化不明显,OM组约为CM组1.5倍,E2组约为OM组2倍,差异有统计学意义(F=119.1,P<0.0001)。第5、9天,E2组成骨相关蛋白表达水平在均比OM、CM组高。第19天,E2组比OM组形成更多矿化结节。E2组miR-20a-5p表达水平在第5天为OM组的2倍(Mann-Whitney U=20.000,P=0.013),在第9天为OM组的1.5倍(Mann-Whitney U=32.000,P=0.079);而miR-29a-3p的表达水平相比OM组无明显变化(5 d:Mann-Whitney U=0.000,P>0.999,Mann-Whitney U=10.000,9 d:P=0.680)。结论 E2能促进大鼠BMSC的成骨分化,同时提高mi R-20a-5p的表达水平。

• 单位
  中山大学附属第三医院