PML-RARα245与hGM-CSF双基因DNA疫苗的构建与表达

作者：胡刚; 周羽竝; 岑东芝; 杨力建; 陈少华; 李扬秋

来源：江苏医药, 2013, 39(08): 878-881+864.

DOI：10.19460/j.cnki.0253-3685.2013.08.004

• PML-RARα融合基因
• hGM-CSF基因
• 急性早幼粒细胞白血病
• DNA疫苗

目的采用长度为245bp的急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因片段构建新的PML-RARα与hGM-CSF真核双表达载体。方法用RT-PCR技术从NB4细胞的RNA中扩增长度为245bp的PML-RARα基因片段,PCR技术从pORF-hGM-CSF质粒中扩增出hGM-CSF基因,分别将两基因片段连接到pIRES质粒的多克隆位点A和B中,构建真核双表达载体。用酶切和序列分析方法验证所构建载体的正确性。将重组质粒转染K562细胞,利用RT-PCR和点杂交技术检测重组质粒在真核细胞中的转录和翻译情况。结果双酶切结果证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα基因片段及hGM-CSF基因,序列分析证明重组质粒中插入片段的碱基序列完全正确。该重组质粒能够在真核细胞中正常转录和翻译。结论成功构建了含有PML-RARα245及hGM-CSF的双表达载体,为筛选合适的抗原片段用于构建治疗急性早幼粒细胞白血病的PML-RARαDNA疫苗提供重要资料。

• 单位
  暨南大学; 惠东县人民医院