猪圆环病毒-Ⅱ型、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒三重RT-qPCR检测方法的建立及初步应用

作者：刘斌; 赵翠青; 刘立明; 沙万里; 董文龙; 刘嘉琳; 李国江^*

来源：中国兽医学报, 2022, 42(07): 1309-1314.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.07.01

• 猪圆环病毒-Ⅱ型
• 猪瘟病毒
• 猪繁殖与呼吸综合征病毒
• 荧光定量PCR

针对猪圆环病毒-Ⅱ型(porcine circovirus typeⅡ,PCV-Ⅱ)、猪瘟病毒(swine fever virus, CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)的保守区域设计用于构建荧光定量PCR体系的引物和探针。以构建的重组质粒标准品为模板建立三重荧光定量PCR体系，并对三重荧光定量PCR体系进行优化和特异性检测、灵敏性检测、重复性试验、标准曲线制作。最后利用构建的三重荧光定量PCR体系和普通PCR体系同时进行临床检测，并对两者的检测结果进行对比。结果显示，3种病毒在单重和三重荧光定量PCR体系中均无非特异性扩增；3种病毒在单重和三重荧光定量PCR体系中的灵敏度均可达到10拷贝/μL;单重和三重荧光定量PCR体系组内和组间重复性变异系数均在5%以内；单重和三重荧光定量PCR在稀释度范围内呈现良好的线性关系。应用本研究构建的三重荧光定量PCR体系对106份临床组织样品进行检测，其中PCV-Ⅱ阳性检出率为74.5%,CSFV阳性检出率为34.9%,PRRSV阳性检出率为18.9%,普通PCR检测中PCV-Ⅱ阳性检出率为37.7%,CSFV阳性检出率为16.9%,PRRSV阳性检出率为7.5%。

• 单位
  动物科技学院; 吉林农业大学; 吉林农业科技学院