干扰小RNA下调瘦素的表达对人病理性瘢痕成纤维细胞增殖能力及转化生长因子-β1、Ⅰ型胶原蛋白表达水平的影响

作者：陈晓娟; 周国富; 蔡燕; 向小燕^*

来源：中华整形外科杂志, 2022, 38(02): 215-221.

• 瘦素
• 转化生长因子-β
• Ⅰ型胶原蛋白
• 病理性瘢痕
• 成纤维细胞
• 干扰小RNA

目的探讨干扰小RNA(siRNA)下调瘦素(leptin)的表达对体外培养的人病理性瘢痕成纤维细胞增殖能力及转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原蛋白表达水平的影响。方法收集川北医学院附属医院烧伤整形科手术切除的病理性瘢痕组织(增生性瘢痕、瘢痕疙瘩)。经原代细胞培养及细胞传代, 取第3代细胞用于实验研究。实验分为2组:转染leptin-siRNA为实验组;转染空载体为阴性对照组。细胞转染48 h后进行后续实验。以CCK-8法测定细胞增殖能力。以实时定量聚合酶链反应(PCR)检测leptin、TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA表达水平。以免疫荧光法和Western blotting测定leptin、TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白的蛋白表达量。组间比较采用t检验, P<0.05为差异有统计学意义。结果增生性瘢痕及瘢痕疙瘩组织各纳入5例。与阴性对照组相比, leptin-siRNA转染后24 h和48 h成纤维细胞增殖能力(吸光度A450值)的差异无统计学意义(P>0.05)。增生性瘢痕及瘢痕疙瘩组织中, leptin、TGF-β1以及Ⅰ型胶原蛋白的mRNA相对表达量比较, 实验组比阴性对照组均明显减少(P<0.05)。免疫荧光显示, 瘢痕疙瘩中leptin、TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白的表达高于增生性瘢痕, 且应用siRNA下调leptin后, 增生性瘢痕及瘢痕疙瘩成纤维细胞中leptin、TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白表达明显减少。Western blotting检测结果示增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞中leptin、TGF-β1和Ⅰ型胶原蛋白在siRNA干扰下显著降低, 其转染siRNA组的leptin、TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白表达水平均小于阴性对照组(P均值<0.01)。结论 RNA干扰下调leptin基因的表达可抑制TGF-β1和Ⅰ型胶原蛋白的表达, 有希望用于病理性瘢痕的治疗。

• 单位
  川北医学院附属医院