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摘要
目的通过基因芯片技术寻找与腹膜纤维化相关的关键性miRNA,体内外实验验证其表达,确定其与腹膜纤维化的关系。方法 30只雄性昆明小鼠被分为对照组和实验组。腹腔注射脂多糖(LPS)+高糖透析液建立腹膜纤维化小鼠模型。芯片法检测腹膜组织miRNA表达谱,寻找纤维化腹膜组织中差异表达的miRNA。进一步扩大样本量,用实时定量PCR法验证差异miRNA(miR-200a)表达水平。转化生长因子β1(TGF-β1)刺激,建立体外腹膜间皮细胞上皮-间充质转分化(EMT)模型,分别用细胞免疫荧光、Western印迹、RT-PCR法检测人腹膜间皮细胞中E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、纤连蛋白(FN)的表达变化及定位,实时定量PCR、Taqman探针法检测体外间皮细胞EMT模型中miR-200a的表达变化。结果与对照组相比,实验组小鼠腹膜组织有差异表达的miRNA表达谱。差异倍数>2的miRNA有8个,其中miR-200a表达明显下调(差异倍数3.31,P<0.05)。实时定量PCR验证了miR-200a在腹膜组织中的表达。体外TGF-β1诱导的腹膜间皮细胞EMT模型中发现:分别用TGF-β1作用1、2、3 h后,腹膜间皮细胞的miR-200a表达水平明显下调,作用1 h时下调了46%(P<0.05)。结论 miR-200a在纤维化腹膜组织及腹膜间皮细胞EMT过程中的表达明显下调,提示miR-200a与腹膜纤维化过程密切相关。作用机制可能为其影响相关靶基因,参与调控腹膜间皮细胞EMT,影响腹膜纤维化过程。
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