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摘要
目的:探讨恒古骨伤愈合剂对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)生长、分化的影响及机制。方法:全骨髓贴壁法培养hBMSCs,取第3代以含恒古骨伤愈合剂血清培养基培养(研究组),并以完全培养基为对照组。观察两组hBMSCs形态和碱性磷酸酶(ALP)染色结果。采用四氮唑盐比色法(MTT)检测两组hBMSCs细胞增殖活性。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)测定两组成骨分化特异性标志物转化生长因子-β1(TGF-β1)、人Ⅰ型胶原(ColⅠ)、骨钙素(OCN),破骨分化标志物核因子-κB活化因子受体配体(RANKL),破骨细胞抑制因子(OPG)相对表达量。采用Western blot检测Smad2/3蛋白表达。结果:研究组培养48 h后细胞形态逐渐变为圆形、多边形,细胞界限模糊,呈现聚集特点,类似成骨细胞形态,可见数量不均微小颗粒物质,部分见发育成熟矿化物;对照组培养48 h后细胞形态呈梭形,突起变长,分散生长,细胞两极朝向不规律,可见少量微小颗粒物质。研究组hBMSCs含药血清培养1周后ALP染色程度高、显色范围广,对照组ALP着色弱、强度低,表明研究组hBMSCs分化潜能高。研究组hBMSCs培养不同时间增殖活性高于对照组(均P<0.05)。研究组hBMSCs培养1周TGF-β1、ColⅠ、OCN、OPG mRNA相对表达量高于对照组,RANKL mRNA相对表达量低于对照组(均P<0.05)。研究组hBMSCs培养1周p-Smad2/3蛋白相对表达量高于对照组(均P<0.05)。结论:恒古骨伤愈合剂可上调TGF-β1/Smads信号通路相关促骨形成靶基因表达,促进骨形成,抑制骨吸收,进而促进hBMSCs生长及分化。
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