低温胁迫下山葡萄叶片酵母cDNA文库构建

作者：马**; 马红义; 李承男; 虎志瑞; 丁小雨; 梁敏; 尹晓^*

来源：福建农业学报, 2022, 37(09): 1176-1181.

DOI：10.19303/j.issn.1008-0384.2022.009.008

• 山葡萄
• 酵母cDNA文库
• 低温
• 非生物胁迫

【目的】葡萄栽培过程中，由低温造成的冷害或冻害严重影响葡萄的生长发育、果实品质和产量。山葡萄是葡萄抗寒育种的重要种质资源，本文通过构建低温胁迫下山葡萄叶片酵母cDNA文库，为葡萄抗寒分子机理研究提供物质基础。【方法】以抗寒山葡萄左山-1(V. amuerensis cv.Zuoshan-1)扦插盆栽苗为材料，提取4℃低温处理0、2、4、8、12、24 h后叶片总RNA，采用SMART技术反转录为cDNA，经纯化和短片段去除后克隆至pGADT7三框质粒载体上，经过纯化后获得初级cDNA文库，对初级文库进行扩增、提取文库质粒后转入酵母Y187菌株中，制作扩增的酵母文库，并对文库质量进行鉴定。【结果】经检测所构建的3个读码框初级文库库容分别为1.7×106、2.0×106和1.9×106 cfu，重组率为100%，插入的片段长度主要分布在500～2 000 bp；电泳检测和测序结果表明，插入片段所对应的编码蛋白类型丰富，具有良好的多态性。最终获得的Y187酵母文库滴度为4.0×108 cfu·mL-1。【结论】构建的低温胁迫下山葡萄叶片酵母cDNA文库质量较高，为筛选山葡萄低温胁迫下的互作蛋白提供了材料基础。

• 单位
  宁夏大学