微小RNA-17-5p通过抑制转移生长因子β受体2的表达促进结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

作者：窦婷亭; 束琳; 陈天亮; 赵小乐; 方效昌; 姜毅楠; 冯茂辉; 李炫飞^*

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(10): 1911-1914.

• 结直肠癌
• 微小RNA
• 转移生长因子β受体2
• 增殖
• 迁移
• 侵袭

目的探讨微小RNA(miR)-17-5p对人结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭功能的影响及其机制。方法培养人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116和人正常结肠上皮细胞NCM460, 以上细胞购自美国典型培养物保藏中心。利用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-17-5p在各细胞系内的表达, 构建miR-17-5p抑制剂miR-17-5p inhibitor及其阴性对照negative control并转染至RKO细胞, 分别设为miR-17-5p抑制剂(miR-17-5p inhibitor)组和阴性对照(NC)组。qRT-PCR法检测miR-17-5p表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性。平板克隆实验检测细胞克隆形成能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。qRT-PCR和蛋白印迹法(Western blot)检测转染后细胞内转移生长因子β受体2(TGFBR2)表达水平变化。两组间比较采用t检验, 多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116中miR-17-5p的表达倍数均高于人正常结肠上皮细胞NCM460(3.22±0.72、1.99±0.36、2.26±0.51、1.77±0.60比1.07±0.05, F=5.153, P<0.05), 差异有统计学意义。miR-17-5p inhibitor组miR-17-5p表达水平低于NC组(0.55±0.07比1.03±0.06, t=9.714, P<0.05), 差异有统计学意义。CCK-8实验证实miR-17-5p inhibitor组细胞增殖能力低于NC组(24、48、72、96 h吸光度值分别为(0.21±0.00比0.33±0.03, 0.33±0.01比0.54±0.01, 0.54±0.02比0.79±0.00, 0.83±0.05比1.10±0.08, t=5.041、16.840、17.530、3.977, P<0.05), 差异有统计学意义。平板克隆实验提示miR-17-5p inhibitor组细胞克隆形成能力低于NC组[克隆形成数目(327.33±9.53)个比(504.67±10.96)个, t=27.290, P<0.05], 差异有统计学意义。划痕及Transwell实验结果显示, miR-17-5p inhibitor组细胞迁移及侵袭能力显著低于NC组[划痕实验细胞迁移率(16.83±1.21)%比(35.70±1.04)%, Transwell迁移实验细胞迁移数目(46.00±3.27)个比(146.33±4.92)个, Transwell侵袭实验细胞侵袭数目(131.00±5.35)个比(243.00±5.10)个, t=16.700、24.020、21.420, P<0.05], 差异有统计学意义。生物信息学预测并筛选出miR-17-5p靶基因TGFBR2, qRT-PCR法检测提示miR-17-5p inhibitor组TGFBR2 mRNA表达水平高于NC组(3.22±0.81比0.99±0.07, t=3.888, P<0.05), 差异有统计学意义;Western blot结果表明miR-17-5p inhibitor组TGFBR2蛋白表达水平高于NC组。结论 miR-17-5p在结直肠癌中表达升高, 并且可以通过调控TGFBR2表达水平促进结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。

• 单位
  武汉大学中南医院