蔗糖梯度离心技术方法在提取内质网的应用

作者：付政祺; 杨莹; 田青

来源：医学理论与实践, 2011, 24(17): 2022-2024.

DOI：10.3969/j.issn.1001-7585.2011.17.003

• 内质网提取
• 梯度离心

目的:通过蔗糖梯度离心方法提取内质网,探讨在内质网提取过程中质量控制的关键要素。方法:本文利用蔗糖建立连续的密度梯度,通过超速离心提取HEK293/wt细胞中的内质网,并利用Western blot技术、内质网特异性抗体Bip/GRP78对内质网所处位置进行检测,确定内质网所在层面,成功提取高浓度、高质量的内质网。结果:通过对HEK293/wt细胞的破膜方法和离心时间进行调整,经Western blot技术检测,内质网位于蔗糖梯度的第10、11、12层。结论:选择合适的破膜方法和离心时间是成功提取高浓度、高质量内质网的关键。

• 单位
  基础医学院; 华中科技大学同济医学院; 江汉大学