新城疫病毒V蛋白C端酵母双杂交诱饵质粒的构建与鉴定

作者：高小龙; 仝丽娜; 郭承意; 周雷; 杨峻鹏; 张诚; 李增魁; 文英; 李英

来源：安徽农业大学学报, 2021, 48(02): 241-244.

DOI：10.13610/j.cnki.1672-352x.20210510.017

• 新城疫病毒
• V蛋白
• 诱饵质粒

为构建新城疫病毒(NDV)V蛋白C端酵母双杂交诱饵质粒,用RNA试剂盒提取NDV F48E9株的RNA,通过反转录试剂盒将抽提的RNA反转录,以反转录合成的c DNA为模板,通过PCR扩增,获得V蛋白C端基因(VCTD)。通过酶切连接的方法将V蛋白C端基因克隆至p GBKT7载体上,命名为p GBKT7-VCTD。将p GBKT7-VCTD转化酵母Y2H Gold酵母感受态细胞,转化产物涂布营养缺陷型平板,观察平板上菌落生长情况,判定诱饵质粒有无自激活能力;同时挑取平板上的生长的菌落接种液体培养基培养,绘制生长曲线,判定p GBKT7-VCTD诱饵质粒有无毒性。酶切和测序结果表明,成功构建p GBKT7-VCTD诱饵质粒,且该诱饵质粒在酵母细胞中无毒性和自激活能力。本研究成功构建了p GBKT7-VCTD诱饵质粒,为筛选NDV V蛋白C端纳米抗体奠定基础。

• 单位
  青海大学农牧学院