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摘要
目的:从体外实验研究HBV在胎盘滋养细胞的感染和复制,初步探讨HBV经胎盘传播的机制。方法:收集HBV携带孕妇足月胎盘12例,采用密度梯度离心法联合反复贴壁法分离、纯化滋养细胞,提取滋养细胞进行培养。流式细胞术检测滋养细胞中CK-7表达,进行细胞纯度鉴定;免疫双标法结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测滋养细胞CK-7及间质Vimentin的表达,进行细胞形态学鉴定。PCR-荧光探针法检测体外培养24、48、72h滋养细胞上清HBV DNA的表达;微粒子酶免疫分析技术检测体外培养24、48、72h滋养细胞上清HBs Ag和HBeAg的表达。流式细胞分选技术分选出纯度98%以上的滋养细胞,荧光定量PCR检测滋养细胞中HBV ccc DNA的表达。结果:12例HBV携带孕妇胎盘滋养细胞体外培养24、48、72h,上清均可检测到HBV DNA和HBsAg、HBeAg的阳性表达。HBV-M滴度在24h表达量最高,随着时间的推移,HBV DNA滴度逐渐下降,而HBs Ag和HBe Ag滴度呈先下降后上升的趋势,但3个时间点均无统计学差异(P>0.05);3个时间点上清HBs Ag和HBe Ag的表达量有良好的相关性(P<0.05)。12例HBV胎盘滋养细胞标本中,4例检测出HBV cccDNA阳性,阳性率为33.3%,表达量(copies/ml)分别为5.67×103、2.12×104、1.72×104、4.90×104。Pearson相关分析结果显示,母血HBV DNA滴度和滋养细胞HBV cccDNA滴度呈良好的正相关(r=0.977,P=0.023)。结论:HBV可感染胎盘滋养细胞并在滋养细胞内繁殖复制。
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