Yes相关蛋白通过调控细胞骨架F-actin蛋白表达抑制肿瘤坏死因子-α引起的肠上皮屏障损伤

作者：叶晓琳; 吴捷^*; 曹培同; 王东伟

来源：中国小儿急救医学, 2022, 29(06): 462-467.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1673-4912.2022.06.012

• Yes相关蛋白
• 炎症性肠病
• 肠上皮屏障
• 肿瘤坏死因子-α
• 细胞骨架蛋白F-actin

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)在肠上皮屏障损伤中的作用及分子机制。方法培养人结肠腺癌细胞株Caco-2细胞建立肠上皮屏障模型, 分为4组:对照组, 正常建好屏障的Caco-2细胞不做任何处理;重组人肿瘤坏死因子(rhTNF)-α组, 建好屏障的Caco-2细胞加入rhTNF-α 100 μg/L刺激细胞;Vector+rhTNF-α组, 建好屏障的Caco-2细胞先加入对照质粒pcDNA3.1-vector, 24 h后加入rhTNF-α 100 μg/L刺激细胞;YAP+rhTNF-α组, 建好屏障的Caco-2细胞先加入YAP质粒pcDNA3.1-YAP, 24 h后加入rhTNF-α 100 μg/L刺激细胞。通过实时定量PCR和Western blot检测YAP mRNA和蛋白表达, 应用跨膜电阻(TEER)和荧光黄透过率检测细胞膜通透性, 免疫荧光染色观察细胞骨架蛋白F-actin分布情况。结果与对照组[(607.3±29.3)Ω·cm2]相比, rhTNF-α组TEER[(265.3±32.7)Ω·cm2]明显下降, 而YAP+rhTNF-α组TEER[(387.0±18.7)Ω·cm2]较rhTNF-α组明显升高, 差异均有统计学意义(P<0.001)。荧光黄透过率结果显示, rhTNF-α组(22.7%±0.5%)较对照组(6.3%±0.9%)明显增加, 而YAP+rhTNF-α组(12.2%±0.8%)较rhTNF-α组明显降低, 差异均有统计学意义(P<0.001)。免疫荧光染色结果显示, 与对照组相比, rhTNF-α组细胞骨架F-actin纤维致密斑减少, 部分细胞出现明显横跨细胞的应力纤维结构, 而YAP+rhTNF-α组周边肌动蛋白丝带较清晰, 胞质内应力纤维减少。结论 YAP可抑制TNF-α引起的Caco-2细胞TEER下降、荧光黄透过率增加和细胞骨架F-actin重排。YAP通过调控细胞骨架蛋白F-actin表达从而改善TNF-α介导的肠上皮屏障功能损伤。

• 单位
  中国医科大学附属盛京医院; 首都医科大学附属北京儿童医院