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摘要
目的·利用负染电镜技术分析人源THO亚复合物结构。方法·采用共表达方式在培养的昆虫细胞里表达重组蛋白质组分,利用Ni-NTA亲和层析、Strep-Tactin亲和层析纯化和Superose凝胶过滤层析分离目的蛋白质复合物;通过负染电镜技术和单颗粒重构技术研究THO亚复合物的空间结构。结果·利用两步亲和层析纯化及一步凝胶过滤层析分离获得高纯度的、均一性良好的重组人源THOC1-THOC2-THOC3亚复合物;采用甲酸双氧铀负染后利用电镜技术初步分析了目的复合物的空间结构。结论·利用单颗粒重构技术构建了人源THOC1-THOC2-THOC3复合物的低分辨率模型。
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