非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA方法的建立

作者：徐玲玉; 曹琛福; 李中圣; 陈俊宏; 柳腾飞; 王新凯; 贾伟新^*

来源：畜牧兽医学报, 2022, 53(03): 813-821.

DOI：10.11843/j.issn.0366-6964.2022.03.014

• 非洲猪瘟病毒
• ASFV
• 阻断ELISA
• p54蛋白
• 单克隆抗体

旨在建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)血清抗体的阻断ELISA方法。采用原核表达的ASFV p54蛋白作为包被抗原，并制备了针对p54蛋白的单克隆抗体，采用方阵滴定法确定了阻断ELISA方法的最佳反应条件，并对建立的方法进行了敏感性、特异性、重复性和符合性评价。结果显示，抗原最佳包被浓度为2.0μg·mL-1,抗原包被温度及时间为4℃过夜，被检血清稀释度为1∶40,酶标单抗稀释度为1∶1 000,被检血清作用时间为1 h,酶标单抗作用时间为30 min,底物作用时间为10 min。经阴、阳性样品检测和特异性、敏感性试验，当临界值阻断率≥55.2%时，判定为阳性，当阻断率<43.4%时，判定为阴性，介于两者之间判定为可疑。该方法与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、口蹄疫病毒、猪流感病毒、猪伪狂犬病病毒阳性血清不发生交叉反应，特异性好。批内重复试验及批间重复试验的变异系数(CV)均在10%以内。将该方法进行初步应用，并与商品化ELISA试剂盒进行符合性试验，两者的检测符合率为98%。综上表明，建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，可用于ASFV临床样品的抗体检测。

• 单位
  人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室; 广东海大畜牧兽医研究院有限公司; 华南农业大学; 深圳海关动植物检验检疫技术中心