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摘要
目的：研究三结构域家族蛋白59(tripartite motif family protein 59，TRIM59)在骨肉瘤组织细胞中的表达情况，并探讨其对骨肉瘤侵袭及迁移的影响及可能的分子作用机制。方法：采用蛋白质印迹法及实时荧光定量PCR法检测骨肉瘤组织及细胞中TRIM59的表达水平，并通过免疫组织化学法检测骨肉瘤及相应癌旁组织中TRIM59蛋白的表达水平。通过病毒感染的方法将携带有特异性针对TRIM59基因的shRNA(shTRIM59)和阴性对照shNC转入骨肉瘤U2-OS细胞，采用Transwell小室及划痕愈合实验检测沉默TRIM59基因表达对U2-OS细胞侵袭及迁移能力的影响，蛋白质印迹法检测对上皮-间质转化相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白β-catenin和转录因子4(transcription factor 4，TCF4)表达的影响，最后通过体内实验观察TRIM59基因沉默对骨肉瘤细胞肺转移的影响。通过病毒感染的方法将TRIM59基因过表达载体转入骨肉瘤143B细胞中，同时采用β-catenin信号通路抑制剂XAV939处理TRIM59过表达的细胞，再用蛋白质印迹法检测β-catenin和TCF4蛋白的表达水平，Transwell小室及划痕愈合实验检测骨肉瘤细胞侵袭及迁移能力的变化情况。结果：骨肉瘤组织及细胞中TRIM59 mRNA及蛋白的表达水平均明显升高(P均<0.01)。下调骨肉瘤U2-OS细胞中TRIM59的表达水平后，Transwell小室及划痕愈合实验均表明其侵袭及转移能力减弱(P均<0.01)，U2-OS细胞中N-cadherin和Vimentin蛋白的表达水平明显下调，E-cadherin蛋白的表达水平明显上调(P均<0.05)；同时β-catenin和TCF4蛋白的表达水平均明显下调(P均<0.05)，小鼠体内实验也证实下调TRIM59表达后骨肉瘤细胞肺部转移的发生率降低。上调TRIM59表达后，β-catenin和TCF4蛋白的表达水平均明显上调(P均<0.05)，细胞的侵袭和迁移能力均明显提高(P均<0.05)，但XAV939能明显抑制β-catenin和TCF4蛋白的表达水平，进而恢复抑制骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力(P均<0.05)。结论：TRIM59在骨肉瘤组织及细胞中高表达，TRIM59可能通过激活β-catenin/TCF4信号通路调控体内外骨肉瘤细胞转移的发生。TRIM59可能是骨肉瘤治疗上一个潜在新的靶点。
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