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摘要
目的探讨CD40siRNA调控c-Jun氨基末端激酶(JNK)对自身免疫性心肌炎(EAM)大鼠心肌细胞自噬的影响。方法 6～8周健康雄性Lewis大鼠32只随机均分为EAM组、CD40siRNA治疗组、siRNA对照组和正常对照组。实验第0天和第7天于前3组大鼠后足垫区注射充分混合的猪心免疫球蛋白,0.2 mL/只,建立EAM大鼠模型;正常对照组大鼠后足垫区注射无菌磷酸盐缓冲液(PBS),0.2 mL/只。第7天,CD40siRNA治疗组尾静脉注射25μL CD40siRNA慢病毒表达载体,siRNA对照组尾静脉注射25μL siRNA慢病毒载体。每3天测量1次大鼠体质量,第21天处死所有大鼠,光学显微镜观察大鼠心肌组织的病理变化并计算病理积分,免疫组化染色JNK,采用Western blotting法检测自噬相关蛋白Beclin1和微管相关蛋白轻链3-Ⅱ/Ⅰ比值(LC3-Ⅱ/Ⅰ)。结果各组均无死亡,正常对照组体质量增长速度超过EAM组(P<0.05)。心肌组织病理积分CD40siRNA治疗组明显低于EAM组(P<0.001)。免疫组化染色显示,CD40siRNA治疗组和NC组的p-JNK明显低于EAM组。Western blotting法检测显示,CD40siRNA治疗组和NC组的LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、Beclin1明显低于EAM组,且JNK与LC3-Ⅱ和内参比值具有正相关性斜率(r=0.985,P<0.001)。结论 CD40siRNA可减轻EAM大鼠的炎症,其机制可能与下调JNK抑制自身免疫性心肌炎大鼠心肌细胞自噬有关。
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单位山东大学; 中心实验室
