TaqMan-ARMS法快速检测人MTHFR基因多态性

作者：程力维; 刘绪; 何龙

来源：临床检验杂志, 2018, 36(05): 324-329.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2018.05.02

• 人亚甲基四氢叶酸还原酶基因
• TaqMan-ARMS法
• 基因多态性

目的利用PCR引物的错配扩增和荧光定量PCR技术,建立一种针对人亚甲基四氢叶酸还原酶(methylene tetrahydrofolate reductase,MTHFR)基因多态性的快速荧光扩增检测方法。方法收集已经测序验证的MTHFR基因C677T,A1 298C位点的野生型、杂合型和突变型样本,并据此构建野生型和突变型质粒;根据野生型MTHFR基因序列设计ARMS(扩增阻碍突变系统)引物和Taq Man探针并筛选出最合适的突变检测体系,与已知突变信息的214例样本进行比较,以验证该检测体系的可行性。结果建立的Taq Man-ARMS法性能评估优异,样本的最低检测限为10 copies/μL,样本间交叉检测无核酸扩增,体系检测阴性对照无核酸扩增;重复性及实验室内精密度结果良好,MTHFR-667位点和1 298位点重复性检测的标准差介于0.110.44,纯合和杂合样本的变异系数(CV)均<4.52%。214例临床样本用该法检测结果与测序法的一致性为100%。结论基于Taq Man-ARMS法检测MTHFR的基因多态性方法简单,快捷,精确,适合用于临床样本快速诊断。

• 单位
  武汉大学; 基础医学院; 华中科技大学同济医学院附属普爱医院