波动性高糖对氧糖剥夺/再复供神经元存活的影响

作者：陈秋月; ***; 王莉; 张叶青; 陈慧红; 陈富强; 何泽宝^*

来源：中华危重病急救医学, 2019, (01).

• 波动性高糖
• 氧糖剥夺/再复供
• 海马神经元
• 存活

目的 探讨波动性高糖对氧糖剥夺/再复供(OGD/R)后神经元存活的影响。方法 原代培养小鼠海马神经元,待细胞融合达到80%左右时传代培养。取对数生长期细胞置于缺氧状态(37?℃、5% CO2、95% N2)的培养箱中模拟细胞缺氧,将培养液更换为无糖Hank平衡盐溶液(HBSS)模拟细胞缺糖；设常糖常氧对照组。细胞缺氧缺糖处理6 h后,倒置相差显微镜下观察细胞形态,用CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测细胞活性,再进行分组实验。将细胞随机分为4组,分别采用含不同浓度葡萄糖培养基,置于常氧、5% CO2、37?℃培养条件下继续培养72 h,制备OGD/R模型模拟细胞缺血/再灌注。低糖对照组用含5.5 mmol/L葡萄糖的培养基培养；恒定高糖组用含33.0 mmol/L葡萄糖的培养基培养；波动高糖组日间用含33.0 mmol/L葡萄糖的培养基培养3 h,再用含5.5 mmol/L葡萄糖的培养基培养2 h,交替3次,夜间用含33.0 mmol/L葡萄糖的培养基过夜；高渗对照组用含5.5 mmol/L葡萄糖的培养基与甘露醇配制,渗透压与恒定高糖组相同,有效糖浓度与常糖常氧对照组相同,以排除高糖培养基引起的渗透压变化对结果的影响。各组细胞培养72 h后,倒置相差显微镜下观察细胞形态学改变；用CCK-8试剂盒测定细胞活性；用流式细胞术测定细胞凋亡率。结果 倒置相差显微镜下显示,常糖常氧对照组细胞饱满,折光性强,胞核明显,突起清晰,细胞活性较高。缺氧缺糖处理6 h后,细胞皱缩,折光性差,核质不清,突起不清晰,细胞活性较常糖常氧对照组明显降低(A值：0.34±0.06比1.09±0.06,P<0.01),说明细胞氧糖剥夺(OGD)模型制备成功。更换不同浓度葡萄糖继续培养72 h后,低糖对照组细胞皱缩,胞膜不完整,核质不清,坏死细胞较多；恒定高糖组细胞折光性差,大量细胞漂浮,胞核不明显；而波动高糖组细胞形态正常,细胞折光性稍降低,坏死细胞较少；高渗对照组与恒定高糖组细胞状态接近。与低糖对照组和恒定高糖组比较,波动高糖组细胞活性明显升高(A值：2.04±0.15比0.64±0.18、1.16±0.16,均P<0.01),细胞凋亡率明显降低〔(59.60±2.55)%比(78.15±15.77)%、(95.60±0.14)%,均P<0.05〕；而高渗对照组细胞活性和细胞凋亡率与恒定高糖组比较差异无统计学意义〔细胞活性(A值)：1.07±0.07比1.16±0.16,细胞凋亡率：(87.80±4.53)%比(95.60±0.14)%,均P>0.05〕。结论 波动性高糖对OGD/R后神经元存活可能有一定的保护作用。

• 单位
  台州学院; 神经内科