犬细小病毒、犬腺病毒Ⅰ型和犬腺病毒Ⅱ型三联PCR诊断方法的建立

作者：于永乐; 王吉贵; 苏俊; 杨双双; 刘莹; 李沛然; 李兆达; 刘维全^*

来源：中国兽医学报, 2021, 41(12): 2340-2344.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.12.07

• 犬细小病毒
• 犬腺病毒Ⅰ型
• 犬腺病毒Ⅱ型
• 三联PCR

旨在建立可同时检测犬细小病毒(canine parvovirus, CPV)、犬腺病毒I型(canine adenovirus typeⅠ,CAV-Ⅰ)和犬腺病毒Ⅱ型(canine adenovirus typeⅡ,CAV-Ⅱ)的PCR诊断方法,分别将3种病毒基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Primer Primier 5.0计算机软件设计并合成了2对特异性扩增引物,目的片段大小分别为670 bp(CPV)、497 bp(CAV-Ⅰ)和1 019 bp(CAV-Ⅱ)。分别提取CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ细胞培养物的DNA,进行三联PCR扩增试验。结果表明,所建立的单项PCR及二联PCR扩增良好,其产物经测序比对与引物扩增序列完全一致。在此基础上,优化三联PCR扩增试验条件,成功建立了可同时检测CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的三联PCR诊断方法。并对其特异性和灵敏度进行检测,三联PCR最低检测限度为0.16 pg总DNA,而对犬副流感病毒和犬瘟热病毒的PCR检测结果均为阴性。对送检的20份病料进行检测,结果显示15份为CPV阳性,5份为CAV-Ⅰ阳性,1份为CAV-Ⅱ阳性。

• 单位
  青岛农业大学; 中国农业大学; 农业生物技术国家重点实验室