敲降组蛋白去乙酰化酶HDAC8对斑马鱼ZF4细胞存活率的影响

作者：李飞; 罗军涛; 燕晓霞; 陈静; 张婷婷; 韩兵社; 张俊芳^*

来源：基因组学与应用生物学, 2021, 40(03): 985-990.

DOI：10.13417/j.gab.040.000985

• HDAC8
• 斑马鱼ZF4细胞
• 细胞存活率

组蛋白去乙酰化酶(HDACs)作为表观遗传酶类的重要一员,能够通过去乙酰化核内组蛋白的方式在细胞转录调控中发挥重要作用,然而,其在鱼类生理中的作用目前报道较少。本研究设计合成了斑马鱼HDAC8的shRNA,用Eco R I和Age I酶切构建了pLKO.1-hdac8-shRNA重组质粒,同时构建了一个阴性对照重组质粒(nc),接着将pCMV-VSVG、pCMV-Dr8.91两个慢病毒包装质粒分别与设计好的重组质粒共转染到HEK-293T细胞中进行病毒包装。收集病毒并用其感染ZF4细胞,RT-qPCR检测表明ZF4细胞中hdac8成功被敲降。随后使用台盼蓝染色法检测ZF4细胞存活率,并进一步检测了细胞内凋亡相关基因bax、bcl2、caspase-3的表达情况。研究发现:与对照组(nc)细胞相比,敲降hdac8的细胞存活率显著下降(P<0.05),bax及caspase-3的表达量在敲降hdac8的细胞内显著上调,意味着敲降hdac8的细胞死亡的增加可能是通过上调凋亡水平引起的。本研究为后期对斑马鱼在生长发育过程中及环境压力下的凋亡机制的研究提供基础。

• 单位
  上海海洋大学; 生命科学学院