pEGFP-NTCP稳定转染HEK293细胞系的建立及鉴定

作者：陈雅; 李静; 张文政; 罗敏; 傅晓钟; 刘亭

来源：中国药理学通报, 2016, 32(12): 1767-1772.

DOI：10.3969/j.issn.1001-1978.2016.12.025

• NTCP
• EGFP
• 稳定转染
• 牛磺胆酸
• HEK293细胞
• 高效快速

目的高效快速地建立稳定高表达钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(sodium taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)的HEK293细胞系。方法构建可表达EGFP-NTCP融合蛋白的p EGFP-NTCP重组质粒,并利用Fu GENE 6转染试剂将重组质粒转染至HEK293细胞中。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,挑选转染细胞进行14 d G418筛选和单克隆培养,以获得稳定转染细胞株。用RT-PCR法、qRT-PCR法和Western blot技术检测稳定转染细胞及正常细胞中NTCP mRNA和蛋白的表达情况,并进一步用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)考察稳定转染细胞的牛磺胆酸摄取能力。结果使用本文优化的方法,细胞转染率可达90%。RT-PCR、qRT-PCR、Western blot和牛磺酸摄取实验结果显示:相对于正常组,在荧光显微镜下呈绿色荧光的转染细胞;其NTCP表达均显阳性(P<0.01);且稳定转染细胞的牛磺胆酸摄取能力明显升高(P<0.05)。结论高效快速地建立了稳定高表达NTCP的HEK293细胞系,为胆酸衍生物摄取机制研究奠定了基础。

• 单位
  贵州医科大学