一种γ-环糊精葡萄糖基转移酶构建方法及应用

作者：张洪斌; 陶志杰; 杨静文

来源：2021-08-04, 中国, CN202110890671.X.

本发明公开了一种γ-环糊精葡萄糖基转移酶构建方法及应用,所述方法包括以下步骤：基因合成及重组菌构建：将来自Bacillus Clarkii的基因序列为模板设计引物,通过无缝克隆技术,以pET-28a为载体,构建基因工程菌株E.coliγ-CGT-hfut；酶蛋白表达：将构建好的工程菌株2％接种量接种于100μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中,在37℃、220r/min条件下培养至OD600达到1.8—2.0后,加入终浓度为0.3mmol/L的IPTG诱导,于25℃、200r/min环境中表达培养8h,在4℃、8000r/min的条件下离心15min获得菌体,用0.05mol/L、pH为11的甘氨酸-氢氧化钠洗涤细胞,将重悬菌液于冰浴中超声破碎15min,最终在4℃、6000r/min的条件下离心15min获得粗酶液,即为所述γ-环糊精葡萄糖基转移酶。γ-环糊精葡萄糖基转移酶可以应用与以淀粉为底物,特异性制备高纯度的γ环糊精。

• 单位
  合肥工业大学