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摘要
目的:基于响应面法对紫草药材基因组DNA的提取条件进行优化。方法:考察植物基因组DNA提取试剂盒中不同操作步骤反应时间对紫草药材基因组DNA提取效率与质量的影响；基于响应面法对紫草药材基因组DNA提取过程中取样量、乙醇处理、裂解时间3个条件进行优化；对优化条件进行验证；通过调整PCR扩增体系中的引物浓度，而对紫草药材基因组DNA的PCR扩增体系进行优化。结果:通过考察植物基因组DNA提取试剂盒中不同操作步骤反应时间对紫草药材基因组DNA提取效率与质量的影响，发现不同反应时间的影响不明显；基于响应面法，确定紫草药材基因组DNA的最佳提取条件为取样量100 mg、裂解过夜(12～15 h)、以100%乙醇浸泡样品24 h进行前处理；通过对紫草市场样品100批进行验证，PCR扩增成功率为89%;确定紫草药材基因组DNA的PCR体系中最佳引物浓度为0.10μmol·L-1,当所得基因组DNA仍不能正常扩增时，可将DNA稀释10倍。结论:通过对紫草药材的基因组DNA提取条件和PCR扩增条件进行优化，大大提高了紫草药材基因组DNA的提取与扩增效率，为紫草药材的分子生物学鉴定提供支撑，同时也为其他中药民族药品种的基因组DNA提取条件优化提供了可以参考的依据。
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单位中国药科大学; 中国食品药品检定研究院
