应用果蝇S2细胞高效表达甲型H1N1流感病毒可溶性HA蛋白及其活性分析

作者：姚思敏; 林巧; 张国良; 杨辉; 邓小凤; 聂广; 郑学宝; 刘映霞

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2013, 27(5): 360-362.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2013.05.013

• 果蝇属
• 流感病毒A型
• 血凝素类

目的 应用果蝇S2细胞表达甲型H1N1流感病毒可溶性HA蛋白,并评估其免疫活性.方法 以甲型H1N1流感A/Shenzhen/71/09病毒株作为模版,采用RT-PCR技术扩增HA基因,构建持续性表达载体pAC5.1-HA,协同筛选载体pCoblast共转染至S2细胞,通过Blasticindin抗生素筛选获得稳定转染的S2细胞株.利用Western Blot技术鉴定细胞上清HA蛋白表达,使用Ni亲和柱纯化重组HA蛋白.使用HA免疫BALB/c小鼠3次,利用ELISA检测HA特异性抗体效价.结果 成功克隆A/Shenzhen/71/09 HA基因,长度约1.7×103 bp.将HA基因克隆入pAC5.1-V5/His载体,经过转染、抗生素筛选后获得稳定表达HA的S2细胞株,目的蛋白以分泌形式表达于上清,相对分子质量约75×103 D.免疫小鼠后可诱导机体产生抗HA特异性抗体,免疫后10d、30 d效价分别为1∶1280、1∶5120.结论 获得可溶性表达的HA蛋白,并具有良好的免疫活性,为后期流感免疫诊断试剂的研制、亚单位疫苗的开发、单克隆抗体的制备奠定了基础.

• 单位
  深圳市宝安区慢性病防治院; 深圳市第三人民医院; 广东医科大学