基于PI3K/Akt信号通路探讨乌梅丸含药血清对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

作者：王熙; 张莹雯^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2022, 28(06): 34-42.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220529

• 乌梅丸含药血清
• 胰腺癌
• 增殖
• 侵袭
• 转移
• 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路

目的:观察乌梅丸含药血清对人胰腺癌SW1990细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响,同时探讨其可能的作用机制。方法:制备乌梅丸含药血清,体外培养胰腺癌细胞株SW1990,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法筛选乌梅丸含药血清最佳作用时间用于后续实验;将SW1990细胞分为空白组和乌梅丸低、中、高组(含药血清2%、4%、8%),利用平板克隆实验、细胞划痕实验和细胞侵袭实验分别检测其克隆形成、迁移和侵袭能力;流式细胞术检测乌梅丸含药血清对胰腺癌SW1900细胞凋亡的影响;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SW1990细胞中凋亡相关蛋白,B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),细胞色素C(Cyt C),活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)、cleaved Caspase-9,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路中PI3K,磷酸化(p)-PI3K,Akt,磷酸化(p)-Akt蛋白表达水平。结果:与空白组比较,作用72 h,乌梅丸低、中、高组吸光度A显著降低(P<0.01),与乌梅丸低组比较,乌梅丸中、高组A均显著降低(P<0.01),与乌梅丸中组比较,乌梅丸高组A显著降低(P<0.01),说明乌梅丸作用72 h可呈剂量依赖性抑制SW1990细胞增殖能力,药物最佳作用时间为72 h;与空白组比较,乌梅丸低、中、高组SW1990细胞侵袭能力显著减弱(P<0.01),且呈浓度依赖性;与空白组比较,乌梅丸低、中、高组细胞克隆形成能力、迁移能力均有下降(P<0.05,P<0.01),且呈浓度依赖性;与空白组比较,乌梅丸低、中、高组细胞的总凋亡率显著升高(P<0.01),乌梅丸诱导凋亡作用随给药剂量增加而增强;与空白组比较,乌梅丸低、中、高组Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01),cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9,Cyt C,Bax蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),且呈现出一定的量效关系;与空白组比较,乌梅丸低、中、高组p-PI3K,p-Akt蛋白表达均有减少(P<0.05,P<0.01),且随着剂量的增加,蛋白表达逐渐降低,p-PI3K/PI3K,p-Akt/Akt明显降低(P<0.05,P<0.01),且随着剂量的增加,比值逐渐降低。结论:乌梅丸能明显抑制胰腺癌SW1990细胞的恶性生物学行为,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路,下调PI3K/Akt通路中的蛋白磷酸化水平有关。

• 单位
  湖北中医药大学; 武汉市中医医院; 武汉大学中南医院