CIT siRNA最佳干扰序列的筛选及其在SK-Hep-1肝癌细胞中对CIT表达的抑制

作者：胡月; 刘杞; 周晓芳; 黄丽利; 孙航^*

来源：中华肝脏病杂志, 2019, 27(04): 281-285.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1007-3418.2019.04.008

• RNA, 小干扰
• CIT
• SK-Hep-1人肝癌细胞

目的筛选并合成CIT基因的最佳siRNA干扰序列, 并检测其对人肝癌细胞株SK-Hep-1中CIT基因表达的干扰效率及其对SK-Hep-1人肝癌细胞增殖的影响。方法根据CIT基因序列设计并合成3个siRNA靶点, 通过脂质体转染法转染入SK-Hep-1人肝癌细胞, 用Real-time PCR和蛋白质印迹法检测其对目的基因CIT的敲减效率。采用细胞免疫化学、共聚焦显微镜观察siRNA干扰后48 h, SK-Hep-1细胞中CIT表达的变化情况。用EdU细胞增殖实验检测siRNA干扰后48 h对SK-Hep-1细胞增殖的影响。两样本均数间比较采用t检验, 多样本均数间比较采用单因素方差分析。结果 3条针对不同靶点的干扰序列, 蛋白质印迹法检测结果显示, 相较于对照组, 敲低1、2、3组CIT蛋白的表达水平均降低(P < 0.01), 而敲低1组蛋白表达量最低。Real-time PCR检测结果显示, 相较于对照组, 敲低1、2、3组CIT mRNA表达水平均降低(P < 0.01), 而敲低1组mRNA表达量最低。激光共聚焦显微镜从形态学上也证实转染siRNA之后, CIT的表达明显减弱。EdU增殖实验结果显示, 转染CIT的siRNA将明显减弱SK-Hep-1肝癌细胞的增殖(P < 0.05)。结论成功筛选并合成能有效抑制SK-Hep-1肝癌细胞中CIT基因表达的siRNA片段, 且能明显抑制SK-Hep-1细胞的增殖。

• 单位
  重庆医科大学; 重庆医科大学附属第二医院