一种新的含有Arg-Gly-Asp三肽序列蛇毒解离素的分离纯化及生物活性研究

作者：柯璐琳; 陈艺云; 赵宁宁; 张琼; 陈婉琼; 邱秀梁; 许云禄^*

来源：药学学报, 2019, 54(05): 897-905.

DOI：10.16438/j.0513-4870.2018-1136

• 短尾蝮蛇
• 精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸序列
• 解离素
• 分离纯化
• 生物学活性

蛇毒是一种具有特殊药理活性的物质,其含有一系列能拮抗整合素的小分子多肽,称之为解离素。解离素可以阻断整合素依赖性血小板聚集、肿瘤生长和肿瘤转移等活性。从江浙短尾蝮蛇毒(Gloydius brevicaudus venom, GBV)中分离纯化出含有精氨酸、甘氨酸和天门冬氨酸即RGD序列(Arg-Gly-Asp)的解离素,并鉴定其理化性质,测定其生物活性。应用Superdex 75凝胶过滤色谱,从江浙短尾蝮蛇粗毒中分离蛋白峰,参照Born方法对分离成分进行活性筛选,活性成分蛋白峰再通过Sephadex G-25凝胶过滤、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换色谱和Lichrospher C18反相色谱纯化分离得纯品; SDS-PAGE (Tris-Tricine系统)凝胶电泳及高效液相色谱分析活性成分的纯度; Bradford法测定蛋白浓度;凝胶成像法及质谱法测定其相对分子质量;盘状等电聚焦电泳测定等电点; Rick方法测定蛋白酶活力;自动电位滴定测定磷脂酶A活力;氨基酸测序结果用BLAST程序进行同源性比较; Born方法测定其对血小板聚集的影响。结果显示,粗毒经Superdex 75色谱分离后,获得7个蛋白峰,其中Ⅳ峰有抑制血小板聚集活性,以光密度计算该峰得率约占粗毒的10%;该组分用Sephadex G-25凝胶色谱纯化得主蛋白峰1个,得率约为57.2%; HiPrep DEAE Sepharose FastFlow16/10柱进一步纯化,得到8个蛋白峰,经鉴定第4峰暂定名为:GBV-Ⅳ4,它具有抑制血小板聚集作用,得率约为1.2%;经HPLC和SDS-PAGE证实为单一组分,相对分子质量约为7.442 kDa,等电点为6.3,蛋白酶活力及磷酯酶A2活力均为0。GBV-Ⅳ4对ADP、凝血酶诱导的血小板聚集的IC50分别为0.339和0.577μg·mL-1。综上,从江浙短尾蝮蛇毒中分离得到一个含有RGD三肽序列的解离素GBV-Ⅳ4,具有抑制血小板聚集的活性。

• 单位
  福建医科大学; 福建医科大学附属第一医院