小反刍兽疫病毒N蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

作者：周岩岩; 李玲霞; 吴锦艳; 余树芳; 李娇阳; 刘丹; 冯倩; 孙晶晶; 何苗; 魏凡华^*; 尚佑军^*

来源：中国兽医科学, 2019, 49(10): 1277-1282.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0173

• 小反刍兽疫病毒
• N基因
• 原核表达

为开发可用于小反刍兽疫病毒(PPRV)诊断及其抗原的检测方法,参考GenBank中PPRV Nigeria75/1株N基因序列设计引物,采用RT-PCR方法获得目的基因后连接到载体pCzn1中,转化到大肠杆菌DH5α克隆菌株,经PCR和双酶切鉴定测序后,将阳性克隆转化至大肠杆菌BL21 (DE3)菌株后采用IPTG进行诱导表达。结果表明,成功地构建了含有小反刍兽疫病毒N基因的重组质粒pCzn1-N;诱导条件经过优化后N蛋白为可溶性表达,重组蛋白大小约为64 ku,能够与PPRV阳性血清较好地反应;制备的家兔多克隆抗体效价为1∶128 000,经过纯化后抗体效价为1∶64 000且具有较高的结合特异性;用间接ELISA和Western-blot对N蛋白纯化后制备的家兔多克隆抗体进行分析,发现重组N蛋白的免疫原性良好,且制备的多克隆抗体特异性良好。这表明重组的N蛋白具有较高的特异性及反应活性。

• 单位
  农业部; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 宁夏大学; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 动物科技学院; 安徽农业大学