TEM-1型β内酰胺酶的原核表达纯化及活性验证

作者：李静; 徐建余; 宁年智; 刘传杰; 黄洁; 刘雪超; 李涛; 王慧

来源：生物技术通讯, 2017, 28(03): 319-323.

DOI：10.3969/j.issn.1009-0002.2017.03.015

• TEM-1
• β内酰胺酶
• 表达
• 纯化
• 酶动力学

目的:产β-内酰胺酶是大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等对β内酰胺类抗生素耐药的主要机制之一,该酶能水解青霉素、头孢菌素、碳青酶烯类等多种抗生素,其中TEM型是发现最早且种类最多的β内酰胺酶。探讨TEM-1型β内酰胺酶原核表达载体的构建、酶的纯化及活性验证。方法:利用PCR技术,以大肠杆菌全基因组为模板钓取TEM-1基因,构建p ET22b(+)-TEM-1表达质粒,经测序鉴定后,转入大肠杆菌Transetta(DE3),IPTG诱导表达、亲和纯化,并通过抗生素水解实验验证其酶活性。结果:构建了可溶性表达TEM-1的工程菌,通过亲和纯化最终获得纯度达90%以上的TEM-1型β内酰胺酶,该酶可水解氨苄西林。结论:获得了对氨苄西林具有水解活性的TEM-1型β内酰胺酶,并对其进行了酶动力学参数检测,验证其抗生素水解特性,有利于对临床抗生素的合理应用做出指导。

• 单位
  军事医学科学院; 病原微生物生物安全国家重点实验室; 华北理工大学