miR-181a-5p和BACH2表达对白血病CCRF-CEM细胞凋亡和侵袭的影响

作者：王旭颖; 荆明箴^*; 余谨; 付荣; 杨茹

来源：吉林大学学报(医学版), 2023, 49(04): 840-849.

DOI：10.13481/j.1671-587X.20230403

• 急性淋巴细胞白血病
• 微小RNA-181a-5p
• BTB与CNC同源基因2
• 细胞凋亡
• 细胞侵袭

目的：探讨微小RNA-181a-5p(miR-181a-5p)靶向BTB与CNC同源基因2 (BACH2对急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞凋亡和侵袭的调控作用，并阐明其作用机制。方法：体外构建BACH2过表达重组质粒(overExpBACH2)、miR-181a-5p inhibitor和inhibitor-NC，转染人ALL T淋巴细胞CCRF-CEM，实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和免疫荧光染色检测转染效果。将CCRF-CEM细胞分为对照组、 inhibitor-NC组、 miR-181a-5pinhibitor组、 BACH2过表达(overExpBACH2)组、 miR-181a-5pinhibitor+空载体(EV)组和miR-181a-5pinhibitor+overExpBACH2组。CCK-8法检测各组细胞增殖活性，流式细胞术检测G2期细胞百分率和细胞凋亡率。Western blotting法检测各组细胞中细胞周期蛋白D3 (CyclinD3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)蛋白表达水平，Transwell小室实验检测各组细胞中侵袭细胞数，RT-qPCR法检测各组细胞中基质金属蛋白酶9 (MMP-9)、基质金属蛋白酶14 (MMP-14)和BACH2 mRNA及miR-181a-5p表达水平。结果：miR-181a-5p inhibitor和overExpBACH2质粒均成功转染CCRF-CEM细胞。与对照组比较，miR-181a-5pinhibitor组、overExpBACH2组、miR-181a-5p inhibitor+EV组和miR-181a-5p inhibitor+overExpBACH2组细胞增殖活性明显降低(P<0.05),G2期细胞百分率和细胞凋亡率明显升高(P<0.05)，细胞中CyclinD3蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Caspase-3蛋白表达水平和Bax/Bcl-2比值明显升高(P<0.05)，侵袭细胞数明显减少(P<0.05)，细胞中MMP-9和MMP-14 mRNA及miR-181a-5p表达水平明显降低(P<0.05),BACH2mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。与miR-181a-5p inhibitor组和overExpBACH2组比较，miR-181a-5p inhibitor+overExpBACH2组细胞中上述指标变化趋势更明显。结论：miR-181a-5p可靶向BACH2进而调控ALL细胞侵袭和凋亡，为临床靶向治疗ALL提供了新的靶点。

• 单位
  武汉血液中心