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摘要
为提高黄鳝养殖效率以及肌肉的质量,进一步发掘黄鳝肌肉发育相关基因,以atrogin-1为研究对象,构建了3种原核表达载体:pCold-TF-atrogin-1、pET28a (+)-atrogin-1及pGEX6P-1-atrogin-1。将构建的重组表达载体转入Transetta(DE3)感受态细胞,重组菌株经诱导表达后,仅pCold-TF-atrogin-1/Transetta(DE3)菌株表达出可溶性较高的重组蛋白。IPTG诱导试验结果表明,诱导剂浓度对蛋白质表达可溶性及含量几乎没有影响,诱导时间在20 h最佳。可溶性部分经Ni-NTA柱亲和层析纯化以及SDS-PAGE(10%聚丙烯酰胺)电泳,证实获得了重组蛋白。构建真核表达载体pEGFP-N1-atrogin-1,转染293T细胞,结果表明,atrogin-1融合蛋白在细胞质及细胞核中均有表达,且在细胞核中表达量相对较高。
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单位江西农业大学; 中国水产科学研究院长江水产研究所; 江西省农业微生物资源开发与利用工程实验室
